连续稀释计算器能给出精确的标称浓度，但实际进入检测孔的浓度可能不同。多肽会接触吸头、储液槽和微孔板；混合不充分也会让误差沿稀释链逐级传递。对浓度–响应实验而言，关键是 实际加样形成的浓度系列 是否足够接近设计值，能够支持预定的科学判断。
一项已发表的多肽检测流程
Naylor 等人描述了利用非接触式声波分液，在小鼠 GLP-1 受体细胞实验中检测多肽激动剂的流程。研究者先制备多肽中间浓度溶液，再用适用于声波分液的微孔板建立浓度系列。论文示例在 384 孔板 举办了一场 16 种多肽设置 11 个浓度点，每点做重复；转移至检测板时，每孔加入固定的 每孔 100 nL。流程还通过补液和离心混合中间溶液。这些数字描述的是 实验方案和演示规模，并不是回收率，也不证明每种多肽都能保持效力。[1，Protocol；图 1–2]
| 论文中的设计要素 | 报告设置 | 对实验的意义 |
|---|---|---|
| 检测板 | 384个孔 | 应预先规划孔位、边缘效应和对照。 |
| 浓度系列 | 11分 | 曲线应覆盖响应转换区的上下两侧。 |
| 示例分析物 | 16 种多肽，每点重复 | 重复孔有助于初步评估再现性。 |
| 最终声波分液量 | 每孔 100 nL | 微量转移需要合格的源板和仪器性能验证。 |
作者的初衷是减少样品与塑料吸头之间的接触。这确实是控制吸附的一种合理方法，但声学转移本身会对源板几何形状、流体性质和混合过程提出特定要求。他们的报告是一篇实验方案论文，而非针对所有肽类化学反应的通用头对头回收率研究。[1]
验证实际加样的浓度系列
可先用 连续稀释与板位规划工具 记录目标浓度和体积，然后分别检查 计算, 液体转移, ，以及 生物学或分析读数。独立复算浓度系列；条件允许时，用适当的称重法或染料法核验实际转移体积；在板上不同位置布置多肽特异性对照系列及重复孔。使用吸头时，新吸头和受控预润湿可能影响结果；使用声波分液时，应检查液体适配性及补液后的混合情况。两种分液方式都无法弥补原液浓度赋值错误。
如果只改变分液方式，表观效力曲线就发生变化，不应立即推断受体药理学改变。应重新核对浓度赋值、接触表面、基质添加剂、最终溶剂比例、板位和检测时间。有些为减轻吸附而加入的辅料也可能改变检测结果，因此每种辅料都需设置对照。应将原液到检测孔的完整操作记录与最终拟合曲线一起保存。
较早的 较早实验报告 比较了 GLP-1 和胰高血糖素多肽类似物的声波分液与吸头分液制备方式，报告处理方式会改变表观效力曲线。我们仅取得出版商摘要；它支持关注这一影响方向，但不能给出可转移的效应量，因此本文不主张声波分液有某个数值优势。[2] 后续实验方案还指出，自动化流程使用 少于 1 µL 的样品 ，覆盖标称 3 × 10⁶ 倍浓度范围。这些是流程规模数据，不能证明其他实验室实际加入的浓度准确。[1，Discussion]
接受拟合曲线前的检查
- 确认原液含量的赋值依据，独立复算至少首个、中间及末个标称浓度点。
- 在最小加样体积下检查转移性能与混合，而不只在较大的方便体积下验证。
- 将参照多肽或对照曲线安排在板的多个区域，检查重复孔离散程度及上下平台。
- 若不同分液方式的结果不一致，应比较 实测浓度或回收率 及拟合 EC50；单看曲线位移无法定位误差。
证据能说明什么
这是 细胞实验方法证据。11 点浓度、16 种多肽的板位设计展示了一种实施方式，但不提供通用准确度修正系数，也不支持临床或产品批次声明。它可帮助规划多肽实验耗材与液体转移验证；每个实验室仍须测量自身条件下的转移准确度、多肽回收率及曲线拟合质量。
原始资料与主张溯源
- Naylor J, et al. Automated Acoustic Dispensing for the Serial Dilution of Peptide Agonists in Potency Determination Assays. Journal of Visualized Experiments. 2016;(117):54542. DOI 10.3791/54542, PMID 27911362。 地点： Abstract（研究范围）；Protocol（源板、补液与混合）；图 1 说明（最终转移量 100 nL）；图 2 说明（11 点、16 种多肽及重复孔）。已核对原文全文。本文不声称该研究报告了比较回收率百分比。
- Naylor J, Rossi A, Hornigold DC. Acoustic Dispensing Preserves the Potency of Therapeutic Peptides throughout the Entire Drug Discovery Workflow. SLAS Technology. 2016;21(1):90–96. DOI 10.1177/2211068215587915. 地点： 出版商摘要。本轮仅可查阅摘要，因此只用于说明操作方式可能影响曲线的方向，不据此提出数值结论。
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主要记录和权威来源
- Naylor J 等. 用于效力测定实验中肽类激动剂系列稀释的自动化声学分液技术。《可视化实验杂志》。2016;(117):54542.来源 1. 摘要（研究范围）；实验方案（源板、回填和混合）；图 1 图注（100 nL 最终转移）；图 2 图注（11 个测定点，16 种肽，各重复两次）。已查阅原始全文。未发现回收率比较数据。
- Naylor J、Rossi A、Hornigold DC. 声学分装技术可在整个药物发现工作流程中保持治疗性肽的活性。《SLAS Technology》. 2016;21(1):90–96.来源 2. 出版商摘要。原始的肽类比较研究；本综述中仅提供摘要内容，仅用于指导处理方法相关问题，未涉及任何数值性主张。.
