分析方法 · 基础教学
连续稀释怎么做？把每一管和孔板位置画清楚
按管追踪浓度和剩余体积，再把结果对应到孔板。
一排管子写着 100、50、25 μM，看起来就是不断减半。真正操作时，容易出错的是：从哪一管取、取多少、混匀后又剩多少。我们用一个每次稀释两倍的例子，把这些数字逐管算清楚。
为什么等体积混合，浓度会减半？
取 100 μL、浓度为 100 μM 的溶液，再加入 100 μL 不含肽的稀释液。混合后，总体积为 200 μL。
假设没有损失，肽的总量没有变，但体积翻倍了，因此浓度变为 50 μM。
100 μM × 100 μL ÷ 200 μL = 50 μM
接下来，一管一管往后配
第 1 管准备足够的 100 μM 起始液；第 2–5 管各加入 100 μL 稀释液。操作顺序是：
- 从第 1 管取 100 μL，加入第 2 管，混匀，得到 50 μM。
- 从第 2 管取 100 μL，加入第 3 管，混匀，得到 25 μM。
- 继续按同样方式操作，第 4 管为 12.5 μM，第 5 管为 6.25 μM。
每次都要先混匀，再取液。否则取到的那部分液体，不一定能代表这一管应有的浓度。
浓度算好了，还要数剩余体积
第 2 管混匀后有 200 μL，向第 3 管取走 100 μL 后，只剩 100 μL。后面需要继续转移的管子也是如此。
最后一管不再向后取液，如果没有另外移走一部分，就仍然有 200 μL。第一管剩多少，则取决于你最初准备了多少起始液。安排孔板加样时，要按剩余体积计算，不能把每管都当成还有 200 μL。
到了实验孔里，可能还要再算一次
假设把 50 μM 的工作液，与等体积不含肽的另一份溶液混合，孔内最终浓度就是 25 μM。管上的浓度，不一定是孔内的最终浓度。
先画一张孔板图，把每列浓度、重复孔、空白和溶剂对照写清楚。这样浓度计算才会与实际加样对应起来。
再做一步，你会怎么记录？
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浓度为 12.5 μM，总体积为 160 μL。如果之后取走 80 μL，剩余溶液仍是 12.5 μM，只是体积变为 80 μL。
以上计算都假设肽没有损失。如果低浓度材料吸附到容器上，或者没有保持溶解，实际结果可能偏离计算值。这需要另外检查，不能靠修改稀释公式解决。
用 KPV、LL-37 做梯度时，记录怎么留？
为 KPV 或 LL-37 设计浓度梯度时，先确认起始溶液的浓度和溶剂。把产品规格、批号、稀释表和孔板图放在同一份实验记录中，之后换批次时才容易按相同条件比较。