التخفيف التسلسلي للببتيد: اتبع كل أنبوب وموضع في الصفيحة

يبدو صف من الأنابيب المُعنونة بـ 100 و50 و25 µM بسيطًا. الصعوبة تكمن في تذكّر أي محلول ينتقل إلى أين، وكم تبقّى منه. سنتابع سلسلة تخفيف من مضاعفتين من الأنبوب الأول إلى الصفيحة.

لماذا تُنصّف أحجامٌ متساوية التركيز

ابدأ بـ 100 µL عند 100 µM وأضف 100 µL من ممدد مناسب. الحجم النهائي هو 200 µL. إذا لم تُفقد أي مادة، تبقى كمية الببتيد كما هي بينما يتضاعف الحجم، فيصبح التركيز 50 µM.

100 µM × 100 µL ÷ 200 µL = 50 µM

اتبع الأنابيب الأربعة التالية

احتفظ بما يكفي من محلول 100 µM في الأنبوب 1. ضع 100 µL من الممدد في كل من الأنابيب 2–5. انقل 100 µL من الأنبوب 1 إلى الأنبوب 2 واخلط؛ ثم انقل 100 µL من الأنبوب 2 إلى الأنبوب 3 واخلط. تابع بهذا الترتيب.

التراكيز هي 100، 50، 25، 12.5 و6.25 µM. اخلط قبل أخذ الحجم المنقول إلى الأنبوب التالي، حتى يمثّل السائل المنقول المحلول المخفف حديثًا.

احسب السائل المتبقي في كل أنبوب

يحتوي الأنبوب 2 على 200 µL بعد الخلط، ولكن فقط 100 µL بعد نقل نصفه إلى الأنبوب 3. وينطبق الأمر نفسه على أنابيب النقل اللاحقة. يبقى الأنبوب الأخير عند 200 µL إذا لم تُزل جزءًا منه.

يُهم هذا الفرق عند التخطيط لعدد الآبار التي يمكن لكل أنبوب ملؤها. كما يعتمد الحجم المتبقي في الأنبوب الأول على كمية المخزون الأولي الذي حضّرته.

قد يُخفف المحلول العامل مرة أخرى في البئر

إذا خُلط محلول عامل بتركيز 50 µM مع حجم مساوٍ من محلول آخر لا يحتوي على ببتيد، يكون التركيز النهائي 25 µM. التركيز المكتوب على الأنبوب ليس تلقائيًا هو التركيز في البئر.

ارسم خريطة للوحة تُظهر التركيز والمكررات وآبار الضبط. يحافظ ذلك على ارتباط حساب التخفيف بالتخطيط الفعلي.

تحقق من خطوة أخرى

يفترض الحساب أن الببتيد يبقى مذابًا ولا يُفقد في الحاوية. إذا كانت الاستعادة مهمة عند التراكيز المنخفضة، فتحقق من ذلك بشكل منفصل.

استخدام خطة تخفيف بـ KPV أو LL-37

عند التخطيط لتخفيفات KPV أو LL-37، تحقق من تركيز المخزون والمذيب قبل البدء. احتفظ بجدول التخفيف مع شكل المنتج وتفاصيل الدفعة حتى يمكن مقارنة دفعة لاحقة تحت نفس الظروف المخططة.

LL-37 / KPV

ناقش متطلبات المواد والمستندات مع NHD · تابع مع الدليل التحليلي