MÉTODOS ANALÍTICOS · GUÍA PRÁCTICA
Dilución seriada de péptidos: siga cada tubo y cada posición de la placa
Siga una serie de dilución tubo a tubo, incluido el volumen que queda después de cada transferencia.
Una fila de tubos etiquetados 100, 50 y 25 µM parece sencilla. La dificultad está en recordar qué solución va a dónde y cuánto queda. Seguiremos una serie de dilución al doble desde el primer tubo hasta la placa.
Por qué volúmenes iguales reducen la concentración a la mitad
Comienza con 100 µL a 100 µM y añade 100 µL de diluyente adecuado. El volumen final es 200 µL. Si no se pierde material, la cantidad de péptido permanece igual mientras el volumen se duplica, así que la concentración pasa a ser 50 µM.
100 µM × 100 µL ÷ 200 µL = 50 µM
Sigue los siguientes cuatro tubos
Conserva suficiente solución 100 µM en el tubo 1. Pon 100 µL de diluyente en cada uno de los tubos 2–5. Transfiere 100 µL del tubo 1 al tubo 2 y mezcla; luego transfiere 100 µL del tubo 2 al tubo 3 y mezcla. Continúa en ese orden.
Las concentraciones son 100, 50, 25, 12.5 y 6.25 µM. Mezcla antes de tomar la alícuota para el siguiente tubo, para que el líquido transferido represente la solución recién diluida.
Cuenta el líquido que queda en cada tubo
El tubo 2 contiene 200 µL después de mezclar, pero solo 100 µL después de transferir la mitad al tubo 3. Lo mismo se aplica a los tubos de transferencia posteriores. El tubo final permanece en 200 µL si no retiras una alícuota.
Esa diferencia importa cuando planificas cuántos pocillos puede llenar cada tubo. El volumen restante del primer tubo también depende de cuánto stock inicial preparaste.
Una solución de trabajo puede diluirse de nuevo en el pocillo
Si una solución de trabajo de 50 µM se mezcla con un volumen igual de otra solución que no contiene péptido, la concentración final es 25 µM. La concentración en el tubo no es automáticamente la concentración en el pocillo.
Dibuja un mapa de la placa que muestre concentración, réplicas y pocillos de control. Esto mantiene el cálculo de dilución conectado con la disposición real.
Verifica un paso más
Ver la respuesta
12.5 µM. El volumen final es 160 µL. Si luego eliminas 80 µL, la solución restante sigue siendo 12.5 µM, pero solo quedan 80 µL.
El cálculo supone que el péptido permanece disuelto y no se pierde en el recipiente. Si la recuperación importa a bajas concentraciones, investígalo por separado.
Usar un plan de dilución con KPV o LL-37
Al planificar diluciones de KPV o LL-37, verifica la concentración del stock y el solvente antes de comenzar. Conserva la tabla de dilución con la forma del producto y los detalles del lote para que un lote posterior pueda compararse bajo las mismas condiciones planificadas.
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