MÉTHODES ANALYTIQUES · GUIDE PRATIQUE
Dilution Sérique du Peptide : Suivez Chaque Tube et Position de Plaque
Suivez une série de dilutions tube par tube, en incluant le volume restant après chaque transfert.
Une rangée de tubes étiquetés 100, 50 et 25 µM semble simple. La difficulté est de se rappeler quelle solution va où, et quelle quantité il reste. Nous allons suivre une série de dilutions au demi du premier tube jusqu'à la plaque.
Pourquoi des volumes égaux divisent la concentration par deux
Commencez avec 100 µL à 100 µM et ajoutez 100 µL de diluant approprié. Le volume final est 200 µL. Si aucune matière n'est perdue, la quantité de peptide reste la même tandis que le volume double, donc la concentration devient 50 µM.
100 µM × 100 µL ÷ 200 µL = 50 µM
Suivez les quatre tubes suivants
Gardez suffisamment de solution 100 µM dans le tube 1. Mettez 100 µL de diluant dans chacun des tubes 2–5. Transférez 100 µL du tube 1 dans le tube 2 et mélangez ; puis transférez 100 µL du tube 2 dans le tube 3 et mélangez. Continuez dans cet ordre.
Les concentrations sont 100, 50, 25, 12.5 et 6.25 µM. Mélangez avant de prélever l'aliquote pour le tube suivant, afin que le liquide transféré représente la solution nouvellement diluée.
Comptez le liquide restant dans chaque tube
Le tube 2 contient 200 µL après le mélange, mais seulement 100 µL après avoir transféré la moitié dans le tube 3. Il en va de même pour les tubes de transfert suivants. Le tube final reste à 200 µL si vous ne retirez pas d'aliquote.
Cette différence compte lorsque vous planifiez le nombre de puits que chaque tube peut remplir. Le volume restant du premier tube dépend aussi de la quantité de solution mère de départ que vous avez préparée.
Une solution de travail peut être diluée à nouveau dans le puits
Si une solution de travail à 50 µM est mélangée à un volume égal d'une autre solution ne contenant pas de peptide, la concentration finale est de 25 µM. La concentration sur le tube n'est pas automatiquement la concentration dans le puits.
Dessinez un plan de plaque indiquant la concentration, les réplicats et les puits témoins. Cela permet de relier le calcul de dilution à la disposition réelle.
Vérifiez une étape supplémentaire
Voir la réponse
12.5 µM. Le volume final est de 160 µL. Si vous retirez ensuite 80 µL, la solution restante est toujours de 12.5 µM, mais il ne reste que 80 µL.
Le calcul suppose que le peptide reste dissous et n'est pas perdu dans le récipient. Si la récupération est importante à faibles concentrations, étudiez ce point séparément.
Utilisation d'un plan de dilution avec KPV ou LL-37
Lorsque vous planifiez des dilutions de KPV ou LL-37, vérifiez la concentration de la solution mère et le solvant avant de commencer. Conservez le tableau de dilution avec la forme du produit et les détails du lot afin qu'un lot ultérieur puisse être comparé dans les mêmes conditions prévues.
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