分析方法 · 基礎ガイド

連続ペプチド希釈：各チューブとプレート位置に従ってください

試験管ごとに希釈系列を追い、各移液後に残る体積も含めて確認します。

NHD技術チーム教育用の図3点資料確認：2026-10-11

100、50、25 µM とラベルされた試験管が並んでいると、単純に見えます。難しいのは、どの溶液がどこへ移るのか、どれだけ残るのかを覚えておくことです。ここでは、最初の試験管からプレートまでの2倍希釈系列を1つ追います。

なぜ等量で濃度が半分になるのか

100 µLを100 µMから始め、適切な希釈剤を100 µL加えます。最終容量は200 µLです。物質が失われなければ、ペプチドの量は同じままで容量が2倍になるため、濃度は50 µMになります。

100 µM × 100 µL ÷ 200 µL = 50 µM

試験管1に100 µM溶液を十分に残します。試験管2～5のそれぞれに希釈液を100 µL入れます。試験管1から試験管2へ100 µL移して混ぜ、次に試験管2から試験管3へ100 µL移して混ぜます。同じ順序で続けます。

濃度は100、50、25、12.5、6.25 µMです。次の試験管に分取する前に混ぜて、移す液体が新しく希釈された溶液を表すようにします。

チューブ 2 は混合後 200 µL を含みますが、半分をチューブ 3 に移した後は 100 µL だけになります。後の移し替えチューブにも同じことが当てはまります。アリコートを取り除かなければ、最終チューブは 200 µL のままです。

この違いは、各チューブが何個のウェルを満たせるかを計画するときに重要です。最初のチューブの残量は、調製した開始ストックの量にも依存します。

50 µM の使用液を、ペプチドを含まない別の溶液と等量混合すると、最終濃度は 25 µM になります。チューブ上の濃度が自動的にウェル内の濃度になるわけではありません。

濃度、反復、対照ウェルを示すプレートマップを描きます。これにより、希釈計算が実際のレイアウトと結びつきます。

80 µL の 25 µM 溶液と 80 µL の希釈液を混合します。得られる濃度はいくらですか？

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12.5 µM。最終液量は 160 µL です。そこから 80 µL を取り除いても、残った溶液の濃度は依然として 12.5 µM ですが、残るのは 80 µL だけです。

この計算は、ペプチドが溶解したままで容器に失われないことを前提としています。低濃度で回収率が重要なら、別途検討してください。

KPV または LL-37 の希釈を計画する際は、開始前に原液濃度と溶媒を確認してください。希釈表は製品形態およびロット情報と一緒に保管し、後のバッチを同じ計画条件で比較できるようにしてください。