MÉTODOS ANALÍTICOS · GUIA PRÁTICO
Diluição Seriada de Peptídeos: Acompanhe Cada Tubo e Posição na Placa
Siga uma série de diluição tubo a tubo, incluindo o volume restante após cada transferência.
Uma fileira de tubos rotulados 100, 50 e 25 µM parece simples. A dificuldade é lembrar qual solução vai para onde e quanto resta. Vamos acompanhar uma série de diluição seriada de dois fatores, do primeiro tubo até a placa.
Por que volumes iguais reduzem a concentração pela metade
Comece com 100 µL a 100 µM e adicione 100 µL de diluente adequado. O volume final é 200 µL. Se nenhum material for perdido, a quantidade de peptídeo permanece a mesma enquanto o volume dobra, então a concentração passa a ser 50 µM.
100 µM × 100 µL ÷ 200 µL = 50 µM
Siga os próximos quatro tubos
Mantenha solução suficiente de 100 µM no tubo 1. Coloque 100 µL de diluente em cada um dos tubos 2–5. Transfira 100 µL do tubo 1 para o tubo 2 e misture; em seguida, transfira 100 µL do tubo 2 para o tubo 3 e misture. Continue nessa ordem.
As concentrações são 100, 50, 25, 12.5 e 6.25 µM. Misture antes de retirar a alíquota para o próximo tubo, para que o líquido transferido represente a solução recém-diluída.
Conte o líquido restante em cada tubo
O tubo 2 contém 200 µL após a mistura, mas apenas 100 µL depois que você transfere metade para o tubo 3. O mesmo se aplica aos tubos de transferência posteriores. O tubo final permanece em 200 µL se você não remover uma alíquota.
Essa diferença importa quando você planeja quantos poços cada tubo pode preencher. O volume restante do primeiro tubo também depende de quanto estoque inicial você preparou.
Uma solução de trabalho pode ser diluída novamente no poço
Se uma solução de trabalho 50 µM for misturada com um volume igual de outra solução sem peptídeo, a concentração final é 25 µM. A concentração no tubo não é automaticamente a concentração no poço.
Desenhe um mapa da placa mostrando concentração, réplicas e poços de controle. Isso mantém o cálculo de diluição conectado ao layout real.
Confira mais um passo
Ver a resposta
12.5 µM. O volume final é 160 µL. Se você então remover 80 µL, a solução restante ainda é 12.5 µM, mas apenas 80 µL permanece.
O cálculo assume que o peptídeo permanece dissolvido e não é perdido para o recipiente. Se a recuperação for importante em baixas concentrações, investigue isso separadamente.
Usando um plano de diluição com KPV ou LL-37
Ao planejar diluições de KPV ou LL-37, verifique a concentração do estoque e o solvente antes de começar. Mantenha a tabela de diluição com a forma do produto e os detalhes do lote para que um lote posterior possa ser comparado sob as mesmas condições planejadas.
Discuta requisitos de material e documentos com NHD · Continue com o guia analítico