減衰するシグナルを解釈する前に、光退色と、ペプチド、試料環境、または装置設定の変化を区別してください。
光退色はペプチド分解と同じではない
蛍光団は光を吸収して蛍光を発するが、励起を繰り返すと、その後の発光を減らす変化が生じ得る。これが光退色である。これは標識の光物理的または光化学的挙動に関わる。シグナルが暗くなっただけでは、ペプチド鎖が切断されたとは断定できない。
例示曲線が表すもの
図では、100 × exp(−0.3t) を、任意の時間単位を用いた仮想的な減衰曲線として用いている。これは指定された連続照明中のシグナル低下を例示する。測定された色素の半減期でも、すべての標識ペプチドについて観察期間を設定する方法でもない。
測定条件が変わっていないか確認する
照明強度、露光時間、ゲイン、フィルター、焦点面、読み取り間隔を確認する。測定間で設定が異なると、試料だけに基づく解釈はできない。最初の測定前の光曝露も記録に含める。
濃度と環境も明るさを変化させることがあります
希釈、pH、溶媒、マトリックスは蛍光に影響し得る。系によっては、消光、自己吸収、容器のバックグラウンドが問題になり得る。すべてのシグナル低下が光退色であるわけではない。適切な非標識材料、ブランク、その他の対照は、可能性を区別するのに役立ち得る。
繰り返し可能な比較を維持する
比較可能な試料、容器、設定を用い、計画された読み取りスケジュールと光曝露記録を用意する。保護した試料と照明した試料を比較するときは、他の因子を一定に保つ。ペプチド自体の変化を確認するには、独立した分析が必要になる場合がある。
標識の注文には「蛍光」だけでは足りない
配列、色素、標識部位、連結、必要な情報を指定する。LL-37 と KPV ページはペプチド同一性の出発点である。特定の標識体の入手可能性は別途確認しなければならない。通常のカタログ掲載は、適合する蛍光製品を保証するものではない。
参考文献
公表された知見、仮想的な教育用事例、材料情報は区別されています。再現を試みる前に、原著の方法を読んでください。
関連研究材料
LL-37
KPV研究用の閲覧および材料に関するお問い合わせのみです。このページは、個人向けの医学的助言ではなく、バッチ固有の記録の代替でもありません。
