予想したペプチドピークの隣に、規則性のあるシグナルが現れることがあります。ナトリウムやカリウムの付加イオンに関係する場合もあれば、別の原因もあります。判断する前に、装置の横軸が質量なのか質量電荷比なのかを確認し、イオンの電荷も確かめましょう。
まず最も単純なイオンで説明します
中性ペプチドをMとします。一般的な1価のプロトン化イオンは[M+H]⁺、1価のナトリウム付加イオンは[M+Na]⁺と書きます。この2つのイオンを比べると、ナトリウムがプロトン1個と置き換わっているため、差はナトリウム原子の質量そのものではなく、約21.9819 Daになります。カリウムがプロトンと置き換わる場合の対応する差は約37.9559 Daです。ここで述べているのは特定のイオン形式間の質量差であり、すべての余分なピークに当てはまる間隔ではありません。 [1] [3]
2価になると横軸の間隔は小さくなります
質量分析では通常、質量と電荷数の関係であるm/zを横軸にします。同じ電荷状態で、ナトリウムがプロトン1個と1回置き換わった2種類のイオンでは、電荷数が2なら予想間隔は約21.9819÷2=10.9910 m/z単位になります。カリウムが1回置き換わる場合の対応する間隔は約18.9779です。2価の領域で約11離れたピークを見たからといって、中性分子量が11 Daだけ違うと表現してはいけません。 [2]
金属がプロトン1個と置き換わる場合の理論差
- 1価、ナトリウムがプロトンと置き換わる: 約21.9819 Da；m/z差は約21.9819
- 2価、ナトリウムがプロトン1個と置き換わる: m/z差は約10.9910
- 1価 / 2価、カリウムがプロトン1個と置き換わる: m/z差は約37.9559 / 18.9779
同じ組のイオンをまとめて見つけます
まず根拠のある電荷状態を決め、それに合うプロトン化、付加、同位体分布の情報があるかを探します。必要に応じて保持時間、他の電荷状態、デコンボリューション結果も組み合わせます。保持時間が近いことは手がかりにはなりますが、同一物質であることを万能に証明するものではありません。実際の試料には混合イオン、複数の付加物、不純物が含まれることがあるため、1回の近似差だけで各シグナルに結論を出してはいけません。
付加物と化学的分解は別々に考える必要があります
ナトリウムやカリウムの付加は、試料、溶媒、緩衝塩、接触する材料に関係する可能性があります。これはペプチドが酸化などの化学変化を起こすこととは同じ説明ではありません。一部の付加ピークをうまく説明できたとしても、試料に他の成分がないことにはならず、純度が特定の数値に達したことにもなりません。実験室が脱塩や試料調製条件の変更を提案した場合は、処理前後の記録を残し、その証拠が元の判断を支持するか確認しましょう。
報告書では計算を3行で書けます
1行目にイオンの式と電荷、2行目に観察されたm/zと差、3行目に理論差、許容誤差、支持情報を書きます。たとえば「候補は1回のナトリウム付加、電荷2、理論差は約10.9910 m/z単位」と書けば、「11多いからナトリウム」より明確です。質量精度と分解能は異なり、判断能力も異なります。本稿の近似値は教育用であり、装置設定の一般的な許容範囲を示すものではありません。
物質の同定は製品資料に戻って確認します
BPC-157やMOTS-cなどの製品の予想質量は、実際の配列、末端、修飾に基づく必要があります。見積もり依頼や検査提出の際には、これらの情報と観察されたイオン形式を提供します。切り取られたスペクトル図しかない場合は、まず完全な結果と帰属の説明を求め、それをロットに対応させます。カタログ上の同じ略称は、あらゆる形式の完全な構造定義の代わりにはなりません。
原典
- NIST · isotopic composition and atomic masses
- IUPAC · mass-spectrometry terminology recommendations · 2013
- NIST atomic masses and isotopic compositions: potassium
研究条件と材料資料は分けて確認してください。仮定を明記した計算例はロットの試験結果ではありません。
BPC-157
MOTS-c (Human)
