Um peptídeo fluorescente pode estar corretamente marcado e ainda assim produzir um sinal decepcionante se o instrumento não conseguir excitar ou detectar bem essa marcação. Antes de escolher uma cor, verifique a fonte de luz e os filtros do instrumento.
Um marcador fluorescente tem dois números de comprimento de onda úteis
Excitacão descreve a luz usada para estimular o corante. Emissão descreve a luz que ele devolve. Thermo Fisher lista Alexa Fluor 488 com máximos de excitação/emissão de 494/519 nm e Alexa Fluor 647 com máximos de 650/668 nm. Esses são valores de referência de corante do fabricante, não medições de um lote de peptídeo NHD. A química ao redor e as condições de medição podem afetar o espectro.
Nomes de cores são apenas um ponto de partida
“Verde” ou “vermelho” não especifica uma configuração óptica completa. Um detector também precisa de uma janela de emissão adequada, e uma fonte de luz precisa excitar o corante suficientemente. Comprimentos de onda de pico não são cortes rígidos: os corantes têm espectros mais amplos. Compare a configuração real do instrumento com as informações do corante em vez de apenas corresponder a uma palavra de cor.
O marcador pode alterar o material
Anexar um corante adiciona um grupo químico e altera a massa esperada. A posição de anexação e qualquer ligante devem estar na especificação do pedido. Não se deve assumir que um peptídeo marcado se comporte exatamente como o peptídeo não marcado em todos os ensaios. Se a comparação for importante, planeje um controle não marcado ou outro controle adequado com a equipe de pesquisa.
O que enviar com um pedido de cotação
Forneça a sequência, o corante preferido, o local de ligação, o linker se necessário, e o modelo do instrumento ou as configurações de excitação/emissão. Pergunte quais formas marcadas são viáveis e quais evidências de pureza e identidade estão incluídas. Pergunte também como o corante livre ou o peptídeo não marcado é avaliado quando relevante. Concorde com o material e o escopo analítico antes de tratar uma cotação genérica de “peptídeo fluorescente” como completa.
Próximo passo com NHD
Os cartões de produtos relacionados abaixo identificam famílias de peptídeos do catálogo. Eles não confirmam a disponibilidade de versões biotiniladas, fluorescentes, marcadas com isótopos ou em biblioteca. Para um material modificado, especifique o desenho exato em uma consulta personalizada.
Comece com os Peptídeos personalizados marcados. Para um orçamento, envie NHD sua sequência ou nome do produto, quantidade e documentos necessários. Confirme a forma exata, a viabilidade, os testes disponíveis e as condições de entrega antes de fazer o pedido.
Fontes
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