A porcentagem de área HPLC impressa depende de quais sinais foram integrados. Integração significa decidir onde um pico começa e termina e medir sua área. Um relatório deve tornar esse processo compreensível.
O denominador importa
A pureza por área geralmente compara a área do pico-alvo atribuído com a área total incluída. Excluir alguns sinais altera esse denominador. Algumas exclusões podem ser justificadas pelo método, como uma característica não pertencente à amostra reconhecida; outras precisam de investigação.
Um cálculo didático
Suponha que a área-alvo seja 950 unidades, uma impureza contada seja 30 e picos menores da amostra somem 20. Contar todos eles dá 950 ÷ 1,000 = 95%. Excluir os picos menores da amostra dá 950 ÷ 980, ou cerca de 96.9%. O material não mudou; a contabilidade mudou. Essas são áreas hipotéticas, não frações de massa medidas.
Pergunte sobre o método de integração
Solicite o cromatograma, as configurações de integração e quaisquer picos excluídos. Um procedimento defensável deve ser adequado à medição pretendida, em vez de ajustado simplesmente para produzir um número de pureza maior. Diferentes detectores ou comprimentos de onda também podem alterar as respostas relativas.
Use o resultado dentro do seu escopo
A fração de área relatada não quantifica todo o material não detectado possível no pó. Leia-a junto com evidências de identidade e conteúdo. Se estiver comparando fornecedores, um número de pureza semelhante é um ponto de partida para revisão do método, não prova de que os perfis de impurezas são idênticos.
Materiais relacionados e próximos passos
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Fontes e escopo de leitura
- FDA: ICH Q2(R2), validação de procedimento analítico
- Bachem: Controle de Qualidade de Aminoácidos e Peptídeos
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