分析方法 · 基础教学
质谱峰为什么排成一串?用同位素间距看电荷
一串小峰可能来自同一种肽;看看它们的间距,理解电荷数。
质谱图上几条小峰挨着排成一串,是不是有好几种杂质?有时它们来自同一种分子,只是同位素组成略有不同。先了解这些小峰为什么出现,再看它们的间距怎样帮助判断电荷。
同一种元素,原子质量也可能略有不同
同一种元素的原子,中子数量可能不同,这些不同版本叫同位素。一个分子里如果含有较重的同位素,质量就会略有变化,但肽的氨基酸顺序未必改变。
肽含有很多原子,因此可能形成一组相邻的同位素信号,而不是只有一条线。具体峰形与分子里的元素和同位素组合有关。

电荷越多,为什么峰越挤?
横轴 m/z 是离子质量除以电荷数。用常见的碳同位素间距近似值 1.00335 Da 来理解:单电荷时,相邻峰约隔 1.00335;双电荷约隔 0.50168;三电荷约隔 0.33445。
质量差被更大的电荷数去除,所以在横轴上看起来更挤。这是帮助理解的近似模型,真实峰簇仍要按实际元素组成分析。

先看刻度,别只凭“看起来很近”
把分得清的小峰放大,读取相邻两个峰的位置,再相减。本例中,间距约 0.50 时可考虑双电荷,约 0.33 时可考虑三电荷。
前提是比较的峰属于同一个峰簇。如果两组峰叠在一起,或者仪器没把相邻峰分清,就容易读错。
知道电荷后,怎么换回分子质量?
假设已确认离子为 [M+2H]2+,m/z 为 501.0073。先乘以电荷数 2,再减去加上的两个质子的质量:2 × 501.0073 − 2 × 1.007276,约为 1,000.0000 Da。
峰间距帮助判断电荷,却不能单独确定离子是哪种加合形式。因此,计算前还要确认离子的写法。

用一个小问题检查理解
合理的峰簇能帮助解释质量信号,但不能测出生物活性,也不能确认序列里每个位置。
查看答案
先考虑三电荷,并确认这些峰属于同一个、能分清的峰簇。
查看 MOTS-c、SS-31 图谱时,问电荷怎么确定
查看 MOTS-c 或 SS-31 质谱时,可以询问报告用哪些峰簇判断电荷,再怎样换算成分子质量。带标注的图谱和计算放在一起,会比只留一个最终数字更容易复核。


MOTS-c (Human)
LL-37