MÉTODOS ANALÍTICOS · GUÍA PRÁCTICA
Por qué los picos del espectro de masas forman un grupo: espaciado isotópico y carga
Lea los espacios entre un grupo de picos isotópicos para comprender la carga.
Aparecen varios picos muy próximos en el espectro. ¿Son varias impurezas? Pueden ser, en cambio, un grupo de isótopos de un mismo tipo de molécula. La separación puede ayudar a explicar la carga del ion.
Un mismo elemento puede tener masas ligeramente distintas
Los átomos de un mismo elemento pueden tener distinto número de neutrones. Estas versiones se llaman isótopos. Una molécula que contiene un isótopo más pesado tiene una masa ligeramente distinta, aunque su secuencia peptídica no haya cambiado.
Los péptidos contienen muchos átomos, por lo que una muestra puede dar un grupo de señales isotópicas cercanas en lugar de una sola línea. Los patrones reales dependen de los elementos y de las combinaciones de isótopos presentes.
Por qué más carga estrecha las separaciones
El eje es m/z: masa del ion dividida por la carga. Usando una aproximación común de la separación del isótopo de carbono de 1.00335 Da, un grupo con una sola carga tiene separaciones cercanas a 1.00335 m/z. Con dos cargas, las separaciones son cercanas a 0.50168; con tres, cercanas a 0.33445.
La diferencia de masa se divide por un número mayor. Por eso los picos se acercan más entre sí en este eje.
Lee la escala, no solo la forma
Amplía un grupo claramente resuelto y resta las posiciones de los picos adyacentes. Un espacio cercano a 0.50 m/z sugiere dos cargas en este modelo. Un espacio cercano a 0.33 sugiere tres.
Esto solo funciona si comparas picos del mismo grupo. Grupos superpuestos o una resolución insuficiente pueden hacer que la estimación sea engañosa.
Convierte m/z de nuevo en masa molecular
Supón que el ion se confirma como [M+2H]2+ y su m/z es 501.0073. Multiplica por dos y luego resta la masa de los dos protones añadidos: 2 × 501.0073 − 2 × 1.007276 ≈ 1,000.0000 Da.
El espaciado ayuda a estimar la carga, pero por sí solo no establece el tipo de aducto. Comprueba la fórmula del ion antes de usar este cálculo.
Intenta leer un grupo de tres cargas
Un grupo convincente puede ayudar a interpretar la señal de masa. No mide la actividad del péptido ni establece cada posición en su secuencia.
Ver la respuesta
Tres cargas, siempre que los picos pertenezcan a un grupo adecuadamente resuelto.
Revisión de los gráficos de MOTS-c y SS-31
Para los espectros de MOTS-c o SS-31, pregunta qué grupos isotópicos y estados de carga respaldan la masa molecular reportada. Conserva el espectro anotado junto con el cálculo.
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MOTS-c (Human)
LL-37