分析方法 · 基础教学
色谱只有一个大峰，为什么可能藏着两种成分
先看两个峰有没有分开，再理解报告上的纯度百分比。
色谱图上只有一个大峰，样品就只有一种成分吗？不一定。两种成分出峰时间太接近，信号可能叠在一起，看起来像一个峰。我们先弄懂峰是怎么来的，再看这种情况会怎样影响读图。
先弄懂：色谱峰在表示什么？
做 HPLC 检测时，样品会通过一根色谱柱。不同成分在柱里移动的速度可能不同，出来时被检测器记录下来。图的横轴是时间，纵轴是信号强弱。
如果两种成分几乎同时出来，记录的信号就可能叠在一起。一个看起来平滑的大峰，里面仍可能藏着两个峰。
分得开之后，图会有什么变化？
可以想象两队人走过一道门。如果他们挤在同一时间出来，很难分清两队；如果前后错开，就更容易辨认。色谱分离也有类似作用。
第二张示意图把两个峰拉开了，分别看形状、计算面积就更容易。这是模拟曲线，用来说明分离效果，并不是某批 NHD 产品重新检测后的结果。
怎么用数字描述分离效果？
分离度，记作 Rs，是把“两个峰相隔多远”与“峰有多宽”放在一起比较。本例用峰底部的宽度计算：Rs = 2 ×（后一个峰的时间 − 前一个峰的时间）÷（两个峰宽度之和）。
假设两个峰分别在 5.0 和 5.6 分钟，底部宽度都是 0.4 分钟。代入后：2 × 0.6 ÷ 0.8 = 1.5。峰离得更远，或者峰更窄，这个数通常就会更大。
注意，峰底宽度与半峰高处的宽度，不能混着用，它们对应的计算公式不同。这里的 1.5 是例题答案，并不是给所有检测方法设定的合格线。
这和纯度百分比有什么关系？
按峰面积计算纯度，要先知道哪些信号被分开、被检测到、被计入了面积。如果另一种成分藏在目标峰下面，它的信号就可能一起被算进去。
因此，读纯度结果时，要把完整色谱图和检测方法一起看，不能只盯着百分比。反过来，仅凭峰形，也不能认定每个峰分别是什么成分。
把两个峰放近一点，再算一次
两个峰底部宽度仍为 0.4 分钟，把后一个峰改为 5.2 分钟。现在它们只相隔 0.2 分钟。
查看答案
2 × 0.2 ÷ 0.8 = 0.5。与前面的 1.5 相比，两个峰相对于自身宽度离得更近了。
查看 GHK-Cu、KPV 资料时，可以怎么问？
查看 GHK-Cu 或 KPV 的分析资料时，可以问：“这个百分比用什么方法得到？哪个峰是目标成分？有没有完整图谱？”先确认实际有哪些资料，再比较数字。
BPC-157
GHK-Cu