Ein HPLC Peak kann zwei Komponenten verbergen: Lernen Sie, die Trennung zu lesen

Ein Chromatogramm hat einen großen Peak. Bedeutet das, dass die Probe nur eine Komponente enthält? Nicht unbedingt. Zwei Komponenten, die dicht beieinander ankommen, können ein Signal erzeugen, das wie ein einziger Peak aussieht. So kommt es dazu.

Zuerst: Was zeigt ein Peak?

In HPLC passiert eine Probe eine Säule. Verschiedene Komponenten können sie mit unterschiedlicher Geschwindigkeit durchlaufen. Der Detektor zeichnet ihre Signale auf, wenn sie austreten: Die Zeit verläuft entlang der horizontalen Achse, die Signalstärke entlang der vertikalen Achse.

Wenn zwei Komponenten fast gleichzeitig austreten, zeichnet der Detektor möglicherweise eine kombinierte Form auf statt zwei klar getrennter Peaks.

Warum eine bessere Trennung das Bild verändert

Stellen Sie sich zwei Gruppen vor, die durch eine Tür gehen. Wenn sie zusammen ankommen, zählen Sie sie möglicherweise als eine Menge. Wenn sie zu unterschiedlichen Zeiten ankommen, lassen sich die Gruppen leichter auseinanderhalten. Die Trennung in der Säule dient einem ähnlichen Zweck.

Im zweiten Lehrdiagramm sind die beiden Peaks weiter voneinander entfernt. Das macht jeden einzelnen leichter zu prüfen und zu messen. Dies sind simulierte Kurven, kein Vorher-Nachher-Test einer NHD Charge.

Verwende eine Zahl, um zu beschreiben, wie weit die Peaks auseinanderliegen

Die Auflösung, geschrieben Rs, vergleicht den Abstand zwischen zwei Peakzeiten mit ihren Breiten. Verwende für dieses Beispiel Breiten, die an der Basislinie gemessen werden: Rs = 2 × (zweite Zeit − erste Zeit) ÷ (erste Breite + zweite Breite).

Die Peaks treten bei 5.0 und 5.6 Minuten auf, mit Basislinienbreiten von jeweils 0.4 Minuten. Rs = 2 × 0.6 ÷ 0.8 = 1.5. Ein größerer Abstand oder schmalere Peaks ergeben einen größeren Wert.

Verwechsle Basislinienbreiten nicht mit Halbhöhenbreiten; sie verwenden unterschiedliche Formeln. Außerdem ist 1.5 die Antwort dieses Beispiels, keine Akzeptanzregel für jede Methode.

Warum das für die Reinheit wichtig ist

Eine auf Flächen basierende Reinheitsberechnung hängt davon ab, welche Signale die Methode trennt, detektiert und zählt. Wenn eine andere Komponente unter dem Zielpeak verborgen ist, kann ihr Signal in diese Fläche einbezogen werden.

Lies daher das gesamte Chromatogramm und die Methode, nicht nur den Prozentsatz. Die Peakform allein kann dir auch nicht die Identität jeder Komponente verraten.

Versuchen Sie ein enger beieinander liegendes Peakpaar

Behalten Sie beide Basisbreiten bei 0.4 Minuten, aber verschieben Sie den zweiten Peak auf 5.2 Minuten. Der Abstand beträgt jetzt nur noch 0.2 Minuten.

Informationen zur GHK-Cu- oder KPV-Analyse lesen

Fragen Sie bei GHK-Cu oder KPV, welche Analyseaufzeichnungen verfügbar sind und wie das Zielsignal identifiziert wurde. Wenn ein Reinheitswert angegeben wird, lesen Sie ihn zusammen mit seiner Methode und dem vollständigen Diagramm.

GHK-Cu / KPV

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