LC–MS 基质效应：为何一种替代肽的定量效果可能优于另一种

多肽在纯溶剂中信号很强，在血浆中却可能明显减弱，即使多肽的实际质量没有减少也会如此。与分析物一同洗脱的基质成分会改变电喷雾响应。因此，只用纯溶液配制的校准品，可能无法代表生物样品中的仪器响应。实际选择应是：在目标基质中测试候选替代肽，依据经验证的方法表现选择定量肽，而非只看信号强弱。

利妥昔单抗分析中的实测例子

在一项比较人血浆中利妥昔单抗的LC–MS/HRMS和LC–MS/MS检测方法的研究中，研究人员在蛋白质制备和消化后合成了替代肽。其表7报告了若干候选肽的基质效应。对于HRMS方法，, 六份不同来源的血浆 ，加入 50 µg/mL 利妥昔单抗. 离子抑制程度存在显著差异：FSGS的平均值为−67%（范围为−54%至−78%）， pQVQ的平均值为−11%（报告范围为+15%至−35%），而pQIVL的平均值为−93%（范围为−88%至−95%）。 作者仅将 pQIVL 用作定性指标，因为其在两种质谱法中均存在较大的基质效应。[1, §2.3.3, 表 7]

所使用的LC–MS/MS系统 四份血浆, 峰值出现在 15 和 300 µg/mL. 其表7报告了pQVQ的平均抑制值为−17%，pQIVL的平均抑制值为−22%。请勿将这些数值与HRMS值合并为一个通用的“肽基质效应”：因为所用的仪器、源计数和加标浓度各不相同。[1]

如何设计实际评估

在蛋白质序列允许的情况下，选择多个候选肽。确认每个候选肽的身份和分离情况，然后比较其纯溶液、萃取后基质和完全处理后基质中的响应。纯溶液与萃取后响应之间的对比有助于识别电离效应；萃取后响应与处理后响应之间的对比可揭示制备过程中的损失。 检查多个独立的基质批次，并验证该检测法必须测定的浓度范围。如果有合适的同位素标记标准品，请追踪经内标归一化的基质因子。本文使用全长标记的利妥昔单抗作为内标，其可经历的制备步骤比仅在消化后添加的肽更多。 标准物质的添加时机必须与该检测法声称要校正的情况相匹配。.

基质效应 取决于具体分析物和方法. 即使抑制程度较低的肽，仍需具备可接受的选择性、校准、精密度和消化特性。如已报道的pQIVL案例所示，如果某候选肽在确认目标物质身份方面仍能保持可靠性，即使其抑制程度较高，有时也可作为定性分析方法；但这并不意味着它能作为可靠的唯一定量方法。 在同一篇论文中，作者报告了其两种经验证方法的校准和精密度结果，但这些结果并不能证明其可转移至其他抗体或仪器。[1, §§2.3.2–2.3.3]

替代肽选择记录

对每种候选肽，记录：（a）序列特异性和碎片离子证据；（b）酶解产率和漏切形式；（c）低、高浓度下，不同独立基质批次的基质因子分布；（d）保留时间与干扰物的分离情况；（e）内标归一化后的表现。也要保留被淘汰的候选肽及淘汰理由。纯溶剂中的高信号不能代替这些检查。

该 ICH M10 指南 将基质效应独立定义为：基质成分导致分析物响应发生变化。在法规用途的生物分析方法验证中，指南要求在低、高质量控制水平，使用 至少六份 矩阵来源/批次，并对罕见矩阵给予合理的灵活性。这是一个相关的设计基准，而非针对每项探索性研究检测的强制性要求；该论文中的HRMS实验也使用了六份血浆样本，而其MS/MS实验组则使用了四份。[2，第1.3节和第3.2.3节]

适用边界与下一步

上述实测值来自 人血浆中的利妥昔单抗替代肽, ，而非游离肽标准品或NHD产品。这些结果说明了为何不能根据另一条序列来推断某条序列的分析响应。若要解释特定肽的确切质量和碎裂情况，请使用 LC–MS 鉴定指南；理解色谱峰面积与含量的区别时，可参考 纯度与含量指南。两篇指南都不能替代与基质相匹配的方法验证。

原始资料与主张溯源

1. Development, Validation, and Comparison of Two Mass Spectrometry Methods (LC-MS/HRMS and LC-MS/MS) for the Quantification of Rituximab in Human Plasma. 分子. 2021;26:1383. DOI 10.3390/molecules26051383, PMID 33806585。 地点： §2.3.3 和表 7（血浆源计数、加标水平、肽特异性基质效应以及 pQIVL 合格判定）；§2.3.2（校准背景）；方法（全长稳定同位素利妥昔单抗）。已对照原始全文 XML 文件核对了表格中的数值。.
2. International Council for Harmonisation. ICH M10：生物分析方法验证与研究样品分析，最终版指南，2022。 地点： §§1.3 和 3.2.3；监管范围和独立矩阵-批次设计。这是权威的方法指南，并非该研究中测得的抑制值的证据。.

编辑来源核查： Codex 人工智能辅助编辑审阅 · 2026-09-23T20:13:54+08:00