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研究与见解

加标回收率怎么算:跟着一组数据做一遍

作者:NHD 技术团队已发表

你在样品里额外加了已知量的目标物,最后多测出来的量是否与加入量相符?这就是加标回收实验常问的问题。它能帮助评估方法,但并不是给每一份样品“自动纠错”的按钮。

加标回收率怎么算:跟着一组数据做一遍
编辑插画,用于解释研究主题,不是实验照片。

先理解“加标”在加什么

加标通常是向样品中加入有明确身份和量值的参考材料,再经过规定的处理和检测。加进去的是已知目标物,不是随便找一瓶同名原料。实验需要知道参考材料的含量基准、加入量和加标时点。不同基质与浓度水平可能表现不同,不能用一个条件下的结果概括所有样品。

最容易漏掉的是原样已有的量

假设未加标样品测得10.0 μg,加标样品测得14.5 μg,向对应样品加入的参考量为5.0 μg,且各结果已换算到同一可比基准。回收率=(14.5−10.0)÷5.0×100%=90%。若把14.5直接除以5.0,就把原样本来已有的目标物也算进了“回收”。这三个数是教学假设,不是实际批次数据。

教学算例:先扣掉原样,再除以加入量
完全假设的数据;90%不是本页设定的通过限度,不代表NHD实测结果。
教学算例:先扣掉原样,再除以加入量
  • 未加标 / 加标后: 10.0 μg / 14.5 μg(已统一基准)
  • 额外加入: 5.0 μg
  • 加标回收率: (14.5 − 10.0) ÷ 5.0 × 100% = 90%

加了溶液,分母和体积也可能改变

如果以浓度报告,加入标准溶液会改变体积,原样和加标样的稀释关系就需要一起处理。可先统一换算到对应样品的质量,再做上面的比较;也可采用经确认的浓度与体积校正方式。没有记录最终体积时,单凭一组浓度数字可能算不清。对照样品是否需要加入相同量的空白溶剂,也应在设计时确认。

加标时点决定它覆盖哪些步骤

如果在提取前加标,结果可能包含更多制样步骤的影响;若在提取后才加入,就不能据此证明前面的提取没有损失。对于GHK-Cu这类涉及化学状态的材料,还要确认所加参考物与待测对象是否匹配、处理是否改变了被测状态。一个回收率数字不会自动回答这些身份问题。

90%能不能通过,要先看用途

本文没有设定统一验收范围。应结合方法用途、浓度水平、重复性和预先规定的标准评估。若回收率异常,先检查标准材料、体积、基质干扰、制样损失和仪器响应;不要直接把所有结果除以0.90,再宣称已经得到真实含量。是否允许校正及怎样校正,需要对应的方法依据。 [1]

把结果写成别人能复算的记录

记录未加标结果、加标后结果、已知加入量、体积处理、加入时点和计算式。送检谷胱甘肽或GHK-Cu等材料时,可以说明最关心的是定量偏差还是某一步的回收,并由实验室确认设计。目录材料不是天然具备赋值资格的标准品,参考材料与普通研究材料的用途应分别确认。

原始来源

  1. FDA · ICH Q2(R2) validation of analytical procedures

原文中的研究条件与材料资料应分别核对。计算示例已注明假设,不能当作批次检测结果。

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