Añades a la muestra una cantidad conocida del analito y, al final, ¿la cantidad extra medida coincide con la añadida? Esta es la pregunta habitual en un ensayo de recuperación por adición de patrón. Ayuda a evaluar el método, pero no es un botón que corrija automáticamente cada muestra.
Primero, entender qué se añade al hacer una adición de patrón
La adición de patrón suele consistir en añadir a la muestra un material de referencia con identidad y valor de cantidad bien definidos, y después someterlo al tratamiento y la detección establecidos. Lo que se añade es un analito conocido, no cualquier frasco de una materia prima con el mismo nombre. El experimento requiere conocer la base de contenido del material de referencia, la cantidad añadida y el momento de la adición. Matrices y niveles de concentración distintos pueden comportarse de forma diferente; no se puede generalizar a todas las muestras el resultado obtenido en una sola condición.
Lo que más fácilmente se pasa por alto es la cantidad ya presente en la muestra original
Supongamos que la muestra sin adición de patrón mide 10.0 μg, la muestra con adición de patrón mide 14.5 μg, la cantidad de referencia añadida a la muestra correspondiente es 5.0 μg y todos los resultados ya se han convertido a una misma base comparable. Recuperación = (14.5 − 10.0) ÷ 5.0 × 100% = 90%. Si se dividiera directamente 14.5 entre 5.0, se estaría contando como «recuperado» también el analito que ya tenía la muestra original. Estos tres números son una hipótesis didáctica, no datos reales de un lote.
Ejemplo didáctico: primero restar la muestra original y después dividir entre la cantidad añadida
- Sin adición / tras la adición: 10.0 μg / 14.5 μg (ya unificados a la misma base)
- Cantidad adicional añadida: 5.0 μg
- Recuperación por adición de patrón: (14.5 − 10.0) ÷ 5.0 × 100% = 90%
Al añadir una disolución, el denominador y el volumen también pueden cambiar
Si se informa en concentración, añadir una disolución estándar cambia el volumen, por lo que la relación de dilución entre la muestra original y la muestra con adición debe tratarse conjuntamente. Puede convertirse primero todo a la masa correspondiente de cada muestra y hacer después la comparación anterior; también puede emplearse un modo de corrección de concentración y volumen que haya sido confirmado. Si no se registra el volumen final, puede que no baste con un conjunto de cifras de concentración para calcularlo con claridad. También debe confirmarse en el diseño si la muestra de control necesita la misma cantidad de disolvente blanco.
El momento de la adición determina qué etapas cubre
Si se añade el patrón antes de la extracción, el resultado puede incluir el efecto de más etapas de preparación de la muestra; si se añade después de la extracción, no puede demostrarse con ello que la extracción previa no haya tenido pérdidas. Para materiales como GHK-Cu, en los que importa el estado químico, también hay que confirmar si el material de referencia añadido coincide con el objeto a medir y si el tratamiento ha alterado el estado medido. Una cifra de recuperación no responde automáticamente a estas cuestiones de identidad.
Para decidir si un 90% es aceptable, primero hay que ver el uso previsto
Este artículo no establece un intervalo de aceptación uniforme. Debe evaluarse junto con el uso del método, el nivel de concentración, la repetibilidad y criterios previamente definidos. Si la recuperación es anómala, conviene revisar primero el material estándar, el volumen, las interferencias de la matriz, las pérdidas en la preparación de la muestra y la respuesta del instrumento; no hay que dividir directamente todos los resultados entre 0.90 y declarar que ya se ha obtenido el contenido real. Si se permite corregir y cómo hacerlo debe corresponder a la base metodológica aplicable. [1]
Dejar el resultado escrito de forma que otra persona pueda recalcularlo
Registrar el resultado sin adición de patrón, el resultado tras la adición, la cantidad añadida conocida, el tratamiento de volúmenes, el momento de la adición y la fórmula de cálculo. Al enviar materiales como glutatión o GHK-Cu a analizar, puede indicarse si lo que más interesa es el sesgo de cuantificación o la recuperación de una etapa concreta, y pedir al laboratorio que confirme el diseño. Los materiales de catálogo no son patrones con capacidad de asignación de valor por naturaleza; el uso de materiales de referencia y el de materiales de investigación ordinarios debe confirmarse por separado.
Fuentes originales
Compruebe por separado las condiciones del estudio y los registros del material. Los cálculos didácticos no son resultados de análisis de lotes.
Glutathione
GHK-Cu
