Você adicionou uma quantidade conhecida do analito à amostra e, no final, a quantidade extra medida corresponde ao que foi adicionado? Essa é a pergunta central do experimento de recuperação de fortificação. Ele ajuda a avaliar o método, mas não é um botão de "correção automática" para cada amostra.
Primeiro, entenda o que é adicionado na fortificação
A fortificação geralmente consiste em adicionar à amostra um material de referência com identidade e valor de quantidade bem definidos, que passa pelo processamento e detecção estabelecidos. O que se adiciona é o analito alvo conhecido, não uma matéria-prima qualquer de mesmo nome. O experimento precisa conhecer a base de conteúdo do material de referência, a quantidade adicionada e o momento da fortificação. Matrizes e níveis de concentração diferentes podem se comportar de modo distinto; não se pode generalizar o resultado de uma condição para todas as amostras.
O que mais se esquece é a quantidade já presente na amostra original
Suponha que a amostra não fortificada meça 10.0 μg, a amostra fortificada meça 14.5 μg, a quantidade de referência adicionada à amostra correspondente seja 5.0 μg e todos os resultados já estejam convertidos para uma mesma base comparável. Recuperação = (14.5 − 10.0) ÷ 5.0 × 100% = 90%. Se você dividir 14.5 diretamente por 5.0, estará incluindo na "recuperação" o analito que já existia originalmente na amostra. Esses três números são hipóteses didáticas, não dados reais de lote.
Exemplo didático de cálculo: primeiro subtraia a amostra original, depois divida pela quantidade adicionada
- Não fortificada / após fortificação: 10.0 μg / 14.5 μg (já unificados na mesma base)
- Adição extra: 5.0 μg
- Recuperação de fortificação: (14.5 − 10.0) ÷ 5.0 × 100% = 90%
Ao adicionar solução, o denominador e o volume também podem mudar
Se o resultado for reportado em concentração, a adição da solução padrão altera o volume, e a relação de diluição entre a amostra original e a fortificada precisa ser tratada em conjunto. Pode-se primeiro converter tudo para a massa correspondente da amostra e depois fazer a comparação acima; também se pode adotar um modo de correção de concentração e volume devidamente confirmado. Sem registrar o volume final, pode ser impossível calcular corretamente apenas com um conjunto de números de concentração. Se a amostra de controle precisa receber a mesma quantidade de solvente branco também deve ser confirmado no planejamento.
O momento da fortificação determina quais etapas ela cobre
Se a fortificação ocorrer antes da extração, o resultado pode incluir efeitos de mais etapas de preparo da amostra; se for adicionada somente após a extração, não se pode provar com isso que a extração anterior não teve perdas. Para materiais como o GHK-Cu, que envolvem estado químico, é preciso confirmar também se a referência adicionada corresponde ao objeto a medir e se o processamento alterou o estado medido. Um número de recuperação não responde automaticamente a essas questões de identidade.
Se 90% pode ser aprovado depende primeiro do uso
Este texto não estabelece uma faixa de aceitação uniforme. A avaliação deve considerar a finalidade do método, o nível de concentração, a repetibilidade e critérios previamente definidos. Se a recuperação for anômala, verifique primeiro o material padrão, o volume, a interferência da matriz, as perdas no preparo da amostra e a resposta do instrumento; não divida simplesmente todos os resultados por 0.90 e declare que se obteve o conteúdo verdadeiro. Se a correção é permitida e como fazê-la depende da base metodológica correspondente. [1]
Registre os resultados de forma que outra pessoa possa recalcular
Registre o resultado não fortificado, o resultado após fortificação, a quantidade adicionada conhecida, o tratamento de volume, o momento da adição e a fórmula de cálculo. Ao enviar materiais como glutationa ou GHK-Cu para análise, pode-se indicar se o que mais importa é o desvio quantitativo ou a recuperação de uma etapa específica, e o laboratório deve confirmar o planejamento. Materiais de catálogo não são padrões com qualificação para atribuição de valor por natureza; o uso de materiais de referência e de materiais comuns de pesquisa deve ser confirmado separadamente.
Fontes originais
Confira separadamente as condições do estudo e os registros do material. Cálculos didáticos não são resultados de análise de lote.
Glutathione
GHK-Cu
