Das Gerät liefert ein Signal, wir wollen aber meist die Konzentration wissen. Eine Kalibriergerade verknüpft bekannte Konzentrationen mit Signalen, doch eine schöne Gerade garantiert nicht, dass sich alle Proben einfach einsetzen lassen.
Mit bekannten Größen eine Beziehung aufbauen
Zuerst Identität, zugewiesenen Wert, Lösungsmittel und Anwendungsbereich des Referenzmaterials bestätigen, dann Kalibrierpunkte vorbereiten, die den erwarteten Probenkonzentrationsbereich abdecken. Die Kurve beschreibt die Response einer bestimmten Methode unter bestimmten Bedingungen. Ändern sich Detektionswellenlänge, Geräteeinstellungen oder Probenmatrix, kann eine Neubewertung nötig sein. Auch Blindproben und unabhängige Kontrollproben mitführen; prüft man sich mit denselben Punkten, aus denen die Kurve erstellt wurde, ist die Fähigkeit, Probleme zu erkennen, begrenzt.
Mit einer einfachen Gleichung einmal rechnen
Angenommen, die Lehrkurve lautet y=1000x+20, x in μg/mL, y in Signaleinheiten. Das Probensignal sei 520, dann gilt x=(520−20)÷1000=0.50 μg/mL. Hier wird zuerst der Achsenabschnitt abgezogen und dann durch die Steigung geteilt; man darf nicht direkt 520÷1000 rechnen. Gleichung und Messwerte sind ein hypothetisches lineares Lehrmodell, keine Messparameter für Glutathion oder andere Peptide.
Lehrkurve und Rückrechnung einer Verdünnung
- Angenommene Gleichung: y = 1000x + 20; x: μg/mL
- Gemessenes Signal 520: Messlösung x = 0.50 μg/mL
- Bei bereits 10-facher Verdünnung: Originalprobe 5.0 μg/mL; prüfen, ob die Software bereits zurückgerechnet hat
Vor dem Zahlenergebnis prüfen, ob der Wert im Bereich liegt
Wenn der validierte Arbeitsbereich der Methode 0.10 bis 1.00 μg/mL beträgt, liegt 0.50 im Bereich; 2.00 liegt außerhalb. Der Computer kann Werte außerhalb des Bereichs berechnen, doch das heißt nicht, dass der Wert ausreichend zuverlässig ist. Liegt eine Probe außerhalb des Bereichs, kann eine dokumentierte, auf Eignung geprüfte Verdünnung erwogen und auf die Originalprobe zurückgerechnet werden; unterhalb des zuverlässig quantifizierbaren Bereichs darf man ebenfalls keine exakte Gehaltsangabe berichten, nur weil Nachkommastellen angezeigt werden.
Der Verdünnungsfaktor wird nur an der richtigen Stelle einmal verwendet
Angenommen, die Probe wird zuerst 10-fach verdünnt und es werden 0.50 μg/mL gemessen, dann ergibt die Rückrechnung über dieses Verdünnungsverhältnis für die Originalprobe 5.0 μg/mL. Hat die Berichtssoftware die Rückrechnung bereits durchgeführt, ist eine weitere Multiplikation mit 10 falsch. Empfohlen ist, in der Tabelle „Konzentration der Messlösung“, „Verdünnungsfaktor“ und „Ergebnis der Originalprobe“ getrennt aufzuführen und zugleich die Definition des Endvolumens anzugeben. Wie viel Lösungsmittel beim Ansetzen zugegeben wird, ist nicht unbedingt dasselbe wie das Auffüllen auf ein bestimmtes Volumen.
Auch bei hohem Korrelationskoeffizienten weiter prüfen
Zu beurteilen sind Residuen, Richtigkeit und Präzision auf den einzelnen Stufen, das Verhalten im unteren Bereich, Blindproben und Kontrollproben. Ein einzelner hoher Konzentrationspunkt kann die Anpassung stark beeinflussen; ein hohes R² in einer Grafik kann eine deutliche Abweichung im niedrigen Konzentrationsbereich verdecken. Ob eine Gewichtung oder ein anderes Modell verwendet wird, sollte methodisch begründet sein und nicht nur die Einstellung mit dem größten R² gewählt werden. ICH Q2(R2) betont, dass Response, Richtigkeit und Präzision zum vorgesehenen Verwendungszweck passen müssen. [1]
Beim Bericht Informationen verlangen, die das Ergebnis erklären
Für die Quantifizierung von Glutathion oder Peptidmaterialien kann man nach Arbeitsbereich, Art der Wertzuweisung des Referenzmaterials, Probenvorbereitung, Verdünnung und Ergebniseinheit fragen. Wenn ein Käufer nur eine bestimmte Identitätsprüfung benötigt, müssen nicht alle Methoden dieselbe Art von Kurve liefern, nur um die Anforderungen dieses Artikels zu erfüllen. Entscheidend sind Nachweise, die zur Fragestellung passen, sowie Aufzeichnungen, die vom Bericht bis zur gelieferten Charge zurückverfolgt werden können.
Originalquellen
Studienbedingungen und Materialunterlagen getrennt prüfen. Gekennzeichnete Rechenbeispiele sind keine Chargenprüfergebnisse.
Glutathione
