L'instrument lit un signal, mais ce que nous voulons souvent connaître, c'est une concentration. La courbe d'étalonnage relie des concentrations connues au signal, mais une belle droite ne garantit pas que tous les échantillons peuvent être calculés directement à partir d'elle.
Établir une relation à partir de quantités connues
Commencez par vérifier l'identité du matériau de référence, sa valeur assignée, son solvant et son domaine d'application, puis préparez des points d'étalonnage couvrant les concentrations attendues des échantillons. La courbe décrit la réponse dans des conditions et avec une méthode données. Un changement de longueur d'onde de détection, de réglage de l'instrument ou de matrice d'échantillon peut nécessiter une nouvelle évaluation. Conservez aussi un blanc et des échantillons de contrôle indépendants ; vérifier le modèle avec les mêmes points qui ont servi à le construire limite la capacité à détecter les problèmes.
Faire un calcul avec une équation simple
Supposons une courbe pédagogique y = 1000x + 20, où x est en μg/mL et y en unités de signal. Pour un signal d'échantillon de 520, on a x = (520 − 20) ÷ 1000 = 0.50 μg/mL. Il faut d'abord soustraire l'ordonnée à l'origine, puis diviser par la pente ; on ne peut pas faire directement 520 ÷ 1000. L'équation et les lectures sont un modèle linéaire pédagogique hypothétique, et non des paramètres de détection du glutathion ou d'un autre peptide.
Courbe pédagogique et recalcul d'une dilution
- Équation hypothétique: y = 1000x + 20 ; x : μg/mL
- Signal mesuré 520: solution injectée x = 0.50 μg/mL
- Si dilution 10 fois: échantillon d'origine 5.0 μg/mL ; vérifier si le logiciel a déjà recalculé
Avant de calculer un chiffre, vérifier qu'il est dans l'intervalle
Si le domaine de travail évalué de la méthode est de 0.10 à 1.00 μg/mL, 0.50 est dans l'intervalle ; 2.00 en sort. L'ordinateur peut calculer une valeur hors intervalle, mais cela ne signifie pas qu'elle soit suffisamment fiable. Lorsqu'un échantillon dépasse l'intervalle, on peut envisager une dilution documentée et confirmée comme adaptée, puis recalculer l'échantillon d'origine ; en dessous du domaine de quantification fiable, on ne peut pas non plus rapporter une teneur précise simplement parce que des décimales s'affichent.
N'utiliser le facteur de dilution qu'une seule fois, au bon endroit
Supposons que l'échantillon soit d'abord dilué 10 fois et que l'on mesure 0.50 μg/mL ; l'échantillon d'origine est alors recalculé à 5.0 μg/mL selon cette relation de dilution. Si le logiciel de rapport a déjà effectué le recalcul, multiplier encore par 10 serait une erreur. Il est conseillé de séparer dans le tableau « concentration de la solution injectée », « facteur de dilution » et « résultat sur l'échantillon d'origine », en précisant la définition du volume final. La quantité de solvant ajoutée lors de la préparation n'est pas nécessairement identique au volume final ajusté.
Un coefficient de corrélation élevé : que faut-il encore examiner
Il faut juger en combinant les résidus, l'exactitude et la fidélité à chaque niveau, le comportement aux faibles concentrations, le blanc et les échantillons de contrôle. Un point de concentration élevée peut fortement influencer l'ajustement ; un R² élevé sur un graphique peut aussi masquer un écart manifeste aux faibles concentrations. Le choix d'une pondération ou d'un autre modèle doit reposer sur la méthode, et non sur la seule sélection du réglage qui maximise le R². ICH Q2(R2) souligne que la réponse, l'exactitude et la fidélité doivent correspondre à l'usage prévu. [1]
Lors de la lecture d'un rapport, demander les informations qui permettent d'interpréter les résultats
Pour la quantification du glutathion ou de matériaux peptidiques, on peut demander le domaine de travail, la méthode d'assignation de valeur du matériau de référence, la préparation des échantillons, les dilutions et l'unité des résultats. Si l'acheteur n'a besoin que d'un contrôle d'identité donné, il n'est pas nécessaire d'exiger de toutes les méthodes le même type de courbe pour appliquer cet article. Ce qui importe vraiment, ce sont des preuves adaptées à la question et des enregistrements permettant de remonter du rapport au lot fourni.
Sources originales
Vérifiez séparément les conditions de l’étude et les documents du matériau. Les calculs pédagogiques ne sont pas des résultats d’analyse de lot.
Glutathione
