MÉTODOS ANALÍTICOS · GUIA PRÁTICO
MOTS-c e um sinal +16 Da: Trabalhando com um candidato à oxidação
Encontre as duas metioninas do MOTS-c e, em seguida, acompanhe a mudança de massa decorrente de um oxigênio adicionado.
Um sinal de MOTS-c aparece aproximadamente 16 Da mais pesado do que o esperado. A oxidação é uma possibilidade a ser investigada. Mas, para entender essa pista, primeiro precisamos encontrar os aminoácidos relevantes e verificar se o gráfico mostra massa molecular ou m/z.
Encontre as duas letras M
Uma sequência de referência comum do MOTS-c é MRWQEMGYIFYPRKLR. M significa metionina. Conte desde o início: os dois resíduos de M estão nas posições 1 e 6.
Use a sequência e os grupos terminais realmente fornecidos ao avaliar uma amostra. A sequência de referência é um ponto de partida, não um substituto para a especificação do material.
Por que um oxigênio dá cerca de 16 Da
Adicionar um oxigênio dá um aumento de massa monoisotópica de 15.994915 Da no registro de oxidação do Unimod. Para dois átomos de oxigênio, o aumento é 31.989830 Da. Esses valores costumam ser abreviados para +16 e +32 na conversa.
Esses números arredondados são pistas úteis. Uma comparação precisa usa o valor mais preciso e a forma molecular correta.
Por que o espectro pode deslocar em apenas 8
Para íons de carga dupla correspondentes, divida a mudança de massa por dois. Um oxigênio desloca m/z em cerca de 7.99746. Dois átomos de oxigênio deslocam em cerca de 15.99492.
Portanto, “um deslocamento de 16” é ambíguo sem dizer qual eixo e qual carga você quer dizer.
A massa total pode dizer qual M mudou?
Não por si só. A oxidação em qualquer uma das metioninas pode dar o mesmo aumento de um oxigênio na massa total. Dados de fragmentação adequados e comparação cromatográfica podem ajudar a investigar a localização e alternativas.
O espectro também não pode dizer quando a mudança aconteceu. Mantenha registros de armazenamento e manuseio junto com os dados analíticos.
Tente um sinal de três cargas
Não converta a intensidade do pico diretamente em porcentagem em peso de oxidação. Isso exige um método quantitativo adequado.
Ver a resposta
15.994915 ÷ 3 ≈ 5.33164. Esse valor por si só ainda não localiza a mudança.
O que perguntar sobre uma amostra de MOTS-c
Para MOTS-c, confirme a sequência real e os grupos terminais, e pergunte quais informações relacionadas à identidade ou estabilidade estão disponíveis. Esta lição explica uma possível mudança de massa; ela não declara um nível de oxidação de lote ou prazo de validade.
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