MÉTODOS ANALÍTICOS · GUIA PRÁTICO
Uma Curva de Calibração de Peptídeos: Calcule uma Concentração Desconhecida
Construa a conexão entre uma concentração conhecida e um sinal do instrumento.
O instrumento fornece um sinal de 6.2, mas você precisa de uma concentração. Como uma pode se tornar a outra? Meça primeiro concentrações conhecidas. Seus sinais fornecem uma curva de calibração que você pode usar para uma amostra desconhecida em condições adequadas.
Comece com amostras cujas concentrações você conhece
Nossos padrões de ensino são 0, 1, 2, 4 e 8 µM. Meça-os usando o método escolhido e, em seguida, plote a concentração no eixo horizontal e o sinal no eixo vertical.
As concentrações devem ser confiáveis. Uma curva feita a partir de padrões preparados incorretamente pode parecer organizada enquanto fornece resultados incorretos. Padrões e amostras desconhecidas também precisam de condições de preparação e medição adequadamente comparáveis.
O que significa y = 2x + 0.2?
Suponha que a relação ajustada seja y = 2x + 0.2. Aqui x é a concentração em µM, e y é a resposta do instrumento em unidades de exemplo. Cada µM adicional acrescenta duas unidades de resposta; o intercepto é 0.2.
Para encontrar x a partir de um sinal, inverta o cálculo: subtraia 0.2 e depois divida por dois. Siga a correção do branco do método; não subtraia o mesmo fundo duas vezes.
Use o sinal desconhecido
Para y = 6.2, x = (6.2 − 0.2) ÷ 2 = 3 µM. Este valor está dentro do intervalo 0–8 µM ilustrado.
Se o desconhecido estiver fora da faixa de trabalho estabelecida do método, não presuma que a linha permanece válida indefinidamente. O laboratório pode precisar de uma diluição adequada ou de outro arranjo de medição validado.
A amostra original foi diluída?
Se a amostra foi diluída cinco vezes antes da medição, a solução medida é 3 µM, enquanto a original é 3 × 5 = 15 µM, assumindo que não houve perda.
Uma parte de amostra mais quatro partes de diluente dá cinco partes no total: uma diluição de cinco vezes, não de quatro vezes. Registre o volume final e o volume de amostra transferido.
Uma linha de aspecto reta ainda precisa ser verificada
Não necessariamente. Um R² alto descreve o ajuste aos dados; por si só, não prova resultados precisos em baixas concentrações. Repetibilidade, branco, recuperação e interferência também precisam de verificações adequadas.
Ver a resposta
A solução medida é (10.2 − 0.2) ÷ 2 = 5 µM. A original é 5 × 3 = 15 µM.
Planejar uma medição de KPV ou LL-37
Para quantificação de KPV ou LL-37, explique se você precisa de um resultado de quantidade do peptídeo-alvo ou de um material de referência adequado para um método. Um produto de catálogo não é automaticamente um padrão de referência certificado.
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