ANALYTISCHE METHODEN · PRAXISLEITFADEN
Eine Peptid-Kalibrierkurve: Berechnung einer unbekannten Konzentration
Stellen Sie die Verbindung zwischen einer bekannten Konzentration und einem Instrumentensignal her.
Das Gerät liefert ein Signal von 6.2, aber Sie benötigen eine Konzentration. Wie kann aus dem einen das andere werden? Messen Sie zuerst bekannte Konzentrationen. Ihre Signale ergeben eine Kalibrierkurve, die Sie unter geeigneten Bedingungen für eine unbekannte Probe verwenden können.
Beginnen Sie mit Proben, deren Konzentrationen Sie kennen
Unsere Lehrstandards sind 0, 1, 2, 4 und 8 µM. Messen Sie sie mit der gewählten Methode und tragen Sie dann die Konzentration auf der horizontalen Achse und das Signal auf der vertikalen Achse auf.
Die Konzentrationen müssen zuverlässig sein. Eine Kurve aus falsch hergestellten Standards kann ordentlich aussehen und trotzdem falsche Ergebnisse liefern. Standards und Unbekannte brauchen außerdem ausreichend vergleichbare Bedingungen bei Vorbereitung und Messung.
Was bedeutet y = 2x + 0.2?
Angenommen, die angepasste Beziehung lautet y = 2x + 0.2. Hier ist x die Konzentration in µM und y die Instrumentenantwort in Beispieleinheiten. Jedes zusätzliche µM fügt zwei Antworteinheiten hinzu; der Achsenabschnitt ist 0.2.
Um x aus einem Signal zu finden, rechnen Sie rückwärts: 0.2 abziehen, dann durch zwei teilen. Befolgen Sie die Blindwertkorrektur der Methode; ziehen Sie denselben Hintergrund nicht zweimal ab.
Verwende das unbekannte Signal
Für y = 6.2 gilt x = (6.2 − 0.2) ÷ 2 = 3 µM. Dies liegt innerhalb des dargestellten Bereichs 0–8 µM.
Wenn die Unbekannte außerhalb des festgelegten Arbeitsbereichs der Methode liegt, darf nicht angenommen werden, dass die Linie unbegrenzt gültig bleibt. Das Labor benötigt möglicherweise eine geeignete Verdünnung oder eine andere validierte Messanordnung.
Wurde die Originalprobe verdünnt?
Wenn die Probe vor der Messung fünffach verdünnt wurde, ist die gemessene Lösung 3 µM, während die Originalprobe 3 × 5 = 15 µM beträgt, sofern kein Verlust auftritt.
Ein Teil Probe plus vier Teile Verdünnungsmittel ergeben insgesamt fünf Teile: eine fünffache Verdünnung, nicht vierfach. Notiere das Endvolumen und das überführte Probenvolumen.
Eine gerade aussehende Linie muss trotzdem überprüft werden
Nicht unbedingt. Ein hohes R² beschreibt die Anpassung an die Daten; es beweist nicht allein genaue Ergebnisse bei niedriger Konzentration. Auch Wiederholbarkeit, Hintergrund, Wiederfindung und Interferenzen müssen angemessen geprüft werden.
Antwort ansehen
Die gemessene Lösung ist (10.2 − 0.2) ÷ 2 = 5 µM. Der Ausgangswert ist 5 × 3 = 15 µM.
Planung einer KPV- oder LL-37-Messung
Für die Quantifizierung mit KPV oder LL-37 erläutern Sie, ob Sie ein Ergebnis für die Zielpeptidmenge oder ein geeignetes Referenzmaterial für eine Methode benötigen. Ein Katalogprodukt ist nicht automatisch ein zertifizierter Referenzstandard.
Besprechen Sie Material- und Dokumentanforderungen mit NHD · Weiter mit dem analytischen Leitfaden