ANALYTISCHE METHODEN · PRAXISLEITFADEN
Ein 8 Da-Schweres Label, aber eine 4 m/z-Verschiebung? Die Ladung erklärt den Unterschied
Verfolgen Sie eine Massenänderung durch Schwerlabel durch die Ladungsberechnung.
Ein Label fügt etwa 8 Da hinzu, aber das Spektrum verschiebt sich nur um 4. Das kann genau dem entsprechen, was Sie für passende doppelt geladene Ionen erwarten. Der Punkt ist, dass eine Massenspektrum-Achse oft m/z statt der gesamten Molekülmasse zeigt.
Warum wird das gelabelte Peptid schwerer?
Stabile Isotopenmarkierung ersetzt ausgewählte Atome durch bestimmte schwerere Isotope an definierten Positionen. Es bedeutet nicht das Anhängen eines nicht näher bezeichneten Schwermetalls. Die Sequenz und die Label-Positionen müssen angegeben werden.
Diese Lektion verwendet ein bewusst gerundetes +8.0000 Da-Beispiel. Die exakte Masse eines echten Labels muss aus seiner tatsächlichen Isotopenzusammensetzung berechnet werden.
Warum 8 Da auf der Achse zu 4 wird
Teilen Sie für ansonsten passende Ionen die Molekülmassendifferenz durch ihre Ladung. Eine Ladung ergibt eine m/z-Verschiebung von 8; zwei Ladungen ergeben 4; drei ergeben etwa 2.6667.
Das Molekül hat trotzdem dieselbe Masse gewonnen. Nur die Art, wie die Achse diesen Unterschied darstellt, hat sich geändert.
Stellen Sie sicher, dass Sie ein Paar vergleichen
Vergleichen Sie leichte und schwere Ionen mit übereinstimmender Ladung und Addukttyp. Ein leichtes Peak mit doppelter Ladung und ein schweres Peak mit dreifacher Ladung können mit dieser einfachen Differenzformel nicht verglichen werden.
Das Isotopenmuster und die chromatographischen Informationen können helfen, die Paarung zu überprüfen. Andernfalls kann ein nahe gelegenes, nicht verwandtes Peak fälschlicherweise für die schwere Form gehalten werden.
Warum ein schweres Peak nicht automatisch einen quantitativen Standard ergibt
Ein interner Standard ist ein Material, das hinzugefügt wird, um Messsignale vergleichen zu können. Um ein markiertes Peptid auf diese Weise zu verwenden, müssen Sie seine Identität und Menge kennen und überprüfen, wie es sich in der gewählten Methode verhält.
Die Markierungsanreicherung, verbleibendes unmarkiertes Material und die Probenrückgewinnung können von Bedeutung sein. Ein Signalverhältnis von leicht zu schwer erfordert eine geeignete kalibrierte Methode, bevor daraus ein Konzentrationsergebnis wird.
Versuchen Sie eine andere Labelmasse
Für eine echte Bestellung geben Sie die vollständige Sequenz, die markierten Positionen, die Isotopenzusammensetzung und die Endgruppen an. “Schweres Peptid” allein ist keine vollständige Spezifikation.
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10.0000 ÷ 2 = 5.0000 m/z.
Anfrage einer markierten MOTS-c-Sequenz
Wenn Ihr Projekt eine markierte MOTS-c-Sequenz benötigt, reichen Sie die vollständige Labelspezifikation als Sonderanfrage ein. Der gewöhnliche Katalogeintrag belegt nicht, dass eine markierte Variante verfügbar ist.
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