MÉTODOS ANALÍTICOS · GUÍA PRÁCTICA
¿Una etiqueta pesada 8 Da pero un desplazamiento m/z 4? La carga explica la diferencia
Siga un cambio de masa de marcaje pesado a través del cálculo de carga.
Una etiqueta añade aproximadamente 8 Da, pero el espectro se desplaza solo 4. Eso puede ser exactamente lo que se espera para iones de doble carga coincidentes. La clave es que el eje de un espectro de masas a menudo muestra m/z en lugar de la masa molecular completa.
¿Qué hace que el péptido marcado sea más pesado?
El marcaje con isótopos estables sustituye átomos seleccionados por isótopos más pesados especificados en posiciones definidas. No significa unir un metal pesado sin especificar. La secuencia y las posiciones del marcaje deben indicarse.
Esta lección utiliza un ejemplo +8.0000 Da deliberadamente redondeado. La masa exacta de un marcaje real debe calcularse a partir de su composición isotópica real.
Por qué 8 Da se convierte en 4 en el eje
Para iones que coinciden en lo demás, divida la diferencia de masa molecular entre su carga. Una carga da un desplazamiento de m/z de 8; dos cargas dan 4; tres dan aproximadamente 2.6667.
La molécula sigue ganando la misma masa. Solo cambió la forma en que el eje muestra esa diferencia.
Asegúrate de que estás comparando un par
Compara iones ligeros y pesados con carga y tipo de aducto coincidentes. Un pico ligero con doble carga y un pico pesado con triple carga no pueden compararse usando esta fórmula simple de diferencia.
El patrón isotópico y la información cromatográfica pueden ayudar a verificar el emparejamiento. De lo contrario, un pico no relacionado cercano puede confundirse con la forma pesada.
Por qué un pico pesado no crea automáticamente un estándar cuantitativo
Un estándar interno es un material añadido para ayudar a comparar señales de medición. Para usar un péptido marcado de esa manera, necesitas conocer su identidad y cantidad, y comprobar cómo se comporta en el método elegido.
El enriquecimiento de la etiqueta, el material sin marcar restante y la recuperación de la muestra pueden importar. Una relación de señal ligero-a-pesado necesita un método calibrado adecuado antes de convertirse en un resultado de concentración.
Pruebe con una masa de etiqueta diferente
Para un pedido real, indique la secuencia completa, las posiciones marcadas, la composición isotópica y los grupos terminales. “Péptido pesado” por sí solo no es una especificación completa.
Ver la respuesta
10.0000 ÷ 2 = 5.0000 m/z.
Solicitar una secuencia de MOTS-c marcada
Si su proyecto necesita una secuencia de MOTS-c marcada, envíe la especificación completa de la etiqueta como una solicitud personalizada. El registro del catálogo ordinario no establece que una variante marcada esté disponible.
Consulte sobre requisitos de material y documentación con NHD · Continúe con la guía analítica