MÉTODOS ANALÍTICOS · GUIA PRÁTICO
Um 8 Da rótulo pesado mas um deslocamento m/z de 4? A carga explica a diferença
Acompanhe uma mudança de massa de marcação pesada através do cálculo de carga.
Um rótulo adiciona cerca de 8 Da, mas o espectro desloca em apenas 4. Isso pode ser exatamente o que você espera para íons de carga dupla correspondentes. O ponto-chave é que um eixo de espectro de massa frequentemente mostra m/z em vez da massa molecular completa.
O que torna o peptídeo marcado mais pesado?
A marcação com isótopos estáveis substitui átomos selecionados por isótopos mais pesados especificados em posições definidas. Não significa anexar um metal pesado não especificado. A sequência e as posições do rótulo precisam ser declaradas.
Esta lição usa um exemplo de +8.0000 Da deliberadamente arredondado. A massa exata de um rótulo real deve ser calculada a partir de sua composição isotópica real.
Por que 8 Da se torna 4 no eixo
Para íons que de outra forma correspondem, divida a diferença de massa molecular pela sua carga. Uma carga dá um deslocamento de m/z de 8; duas cargas dão 4; três dão cerca de 2.6667.
A molécula ainda ganhou a mesma massa. Apenas a forma como o eixo exibe essa diferença mudou.
Certifique-se de estar comparando um par
Compare íons leves e pesados com carga e tipo de aducto correspondentes. Um pico leve de carga dupla e um pico pesado de carga tripla não podem ser comparados usando esta fórmula simples de diferença.
O padrão isotópico e as informações cromatográficas podem ajudar a verificar o pareamento. Um pico não relacionado próximo pode, caso contrário, ser confundido com a forma pesada.
Por que um pico pesado não se torna automaticamente um padrão quantitativo
Um padrão interno é um material adicionado para ajudar a comparar sinais de medição. Para usar um peptídeo marcado dessa forma, você precisa conhecer sua identidade e quantidade, e verificar como ele se comporta no método escolhido.
O enriquecimento do rótulo, o material não marcado remanescente e a recuperação da amostra podem importar. Uma razão de sinal leve para pesado precisa de um método calibrado adequado antes de se tornar um resultado de concentração.
Experimente uma massa de rótulo diferente
Para um pedido real, indique a sequência completa, as posições marcadas, a composição isotópica e os grupos terminais. “Peptídeo pesado” sozinho não é uma especificação completa.
Ver a resposta
10.0000 ÷ 2 = 5.0000 m/z.
Solicitação de uma sequência de MOTS-c marcada
Se o seu projeto precisa de uma sequência de MOTS-c marcada, envie a especificação completa do rótulo como um pedido personalizado. O registro comum de catálogo não estabelece que uma variante marcada esteja disponível.
Discuta requisitos de material e documentos com NHD · Continue com o guia analítico