MÉTHODES ANALYTIQUES · GUIDE PRATIQUE
Un marquage lourd 8 Da mais un décalage m/z 4 ? La charge explique la différence
Suivez un changement de masse par marquage lourd à travers le calcul de charge.
Une étiquette ajoute environ 8 Da, mais le spectre ne se décale que de 4. Cela peut être exactement ce que vous attendez pour des ions à double charge correspondants. L'essentiel est qu'un axe de spectre de masse montre souvent m/z plutôt que la masse moléculaire entière.
Qu'est-ce qui rend le peptide marqué plus lourd ?
Le marquage par isotopes stables remplace des atomes choisis par des isotopes plus lourds spécifiés à des positions définies. Cela ne signifie pas fixer un métal lourd non spécifié. La séquence et les positions de marquage doivent être indiquées.
Cette leçon utilise un exemple +8.0000 Da volontairement arrondi. La masse exacte d'une étiquette réelle doit être calculée à partir de sa composition isotopique réelle.
Pourquoi 8 Da devient 4 sur l'axe
Pour des ions par ailleurs correspondants, divisez la différence de masse moléculaire par leur charge. Une charge donne un décalage m/z de 8 ; deux charges donnent 4 ; trois donnent environ 2.6667.
La molécule a quand même gagné la même masse. Seule la façon dont l'axe affiche cette différence a changé.
Assurez-vous de comparer une paire
Comparez les ions légers et lourds avec une charge et un type d'adduit correspondants. Un pic léger à double charge et un pic lourd à triple charge ne peuvent pas être comparés à l'aide de cette simple formule de différence.
Le profil isotopique et les informations chromatographiques peuvent aider à vérifier l'appariement. Un pic voisin non apparenté peut sinon être confondu avec la forme lourde.
Pourquoi un pic lourd ne constitue pas automatiquement un étalon quantitatif
Un étalon interne est une substance ajoutée pour aider à comparer les signaux de mesure. Pour utiliser ainsi un peptide marqué, vous devez connaître son identité et sa quantité, et vérifier son comportement dans la méthode choisie.
L'enrichissement du marquage, le matériel non marqué restant et la récupération de l'échantillon peuvent avoir une importance. Un rapport de signal léger sur lourd nécessite une méthode calibrée appropriée avant de devenir un résultat de concentration.
Essayez une autre masse de marqueur
Pour une commande réelle, indiquez la séquence complète, les positions marquées, la composition isotopique et les groupes terminaux. “ Peptide lourd ” seul n'est pas une spécification complète.
Voir la réponse
10.0000 ÷ 2 = 5.0000 m/z.
Demande d'une séquence MOTS-c marquée
Si votre projet nécessite une séquence MOTS-c marquée, soumettez la spécification complète du marqueur en tant que demande personnalisée. La fiche catalogue ordinaire n'établit pas qu'une variante marquée est disponible.
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