1つのHPLCピークに2つの成分が隠れていることがあります：分離の読み取りを学びましょう

クロマトグラムに大きなピークが1つあります。これは試料に1つの成分しか含まれていないという意味でしょうか？必ずしもそうではありません。近い時間に溶出する2つの成分は、1つのピークのように見えるシグナルを生じることがあります。その仕組みは次のとおりです。

まず、ピークは何を示すのでしょうか？

HPLCでは、試料がカラムを通過します。異なる成分は異なる速度で通過することがあります。検出器はそれらが溶出するときのシグナルを記録します。横軸に時間、縦軸にシグナルの強さが示されます。

2つの成分がほぼ同時に溶出すると、検出器は明確に分かれた2つのピークではなく、結合した形状を記録することがあります。

より良い分離がなぜ見え方を変えるのか

2つの集団が doorway を通る場面を想像してください。同時に到着すれば、1つの集団として数えてしまうかもしれません。異なる時間に到着すれば、集団をより容易に見分けられます。カラムでの分離も同様の役割を果たします。

2番目の教育用プロットでは、2つのピークがより離れています。そのため、それぞれをより容易に調べ、測定できます。これらはシミュレーションされた曲線であり、NHDバッチの前後比較試験ではありません。

ピーク同士がどれだけ離れているかを数値で表します

分離度は Rs と書き、2つのピーク時間の間隔をそれぞれの幅と比較します。この例では、ベースラインで測定した幅を使います：Rs = 2 ×（2番目の時間 − 1番目の時間）÷（1番目の幅 + 2番目の幅）。

ピークは 5.0 分と 5.6 分に現れ、ベースライン幅はそれぞれ 0.4 分です。Rs = 2 × 0.6 ÷ 0.8 = 1.5。間隔が広いほど、またはピークが狭いほど、値は大きくなります。

ベースライン幅と半値幅を混同しないでください。計算式が異なります。また、1.5 はこの例での答えであり、すべての方法に当てはまる合格基準ではありません。

これが純度にとって重要な理由

面積ベースの純度計算は、その方法がどのシグナルを分離し、検出し、数えるかに依存します。別の成分が目的のピークの下に隠れていると、そのシグナルがその面積に含まれる可能性があります。

そのため、パーセントだけでなく、クロマトグラム全体と方法を確認してください。ピーク形状だけでは、すべての成分の同一性を判断することもできません。

もっと近いピークのペアを試してください

両方のベースライン幅を 0.4 分に保ちますが、2番目のピークを 5.2 分に移動してください。間隔はわずか 0.2 分になりました。

GHK-Cu または KPV の分析情報を読む

GHK-Cu または KPV については、どの分析記録が利用可能か、およびターゲットシグナルがどのように同定されたかを確認してください。純度の数値が提供されている場合は、その方法と完全なプロットとともに読んでください。

GHK-Cu / KPV

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