假设肽检测中最强的信号出现在板的边缘。在判定该肽导致了变化之前,请检查处理和对照被放置在何处。跟随板位置的模式与跟随处理的模式需要不同的调查。
板是测量的一部分
一项 1980 酶免疫测定研究考察了微孔板上的蛋白质吸附。它报告的吸附变异系数为 5.2–29.5%,且边缘孔的吸附更高。在一项夹心测定中,单个样品的报告变异为 ±18%。这些发现涉及所测试的免疫测定和板系统,而非 LL-37、MOTS-c 或 NHD 材料。它们说明了为什么不应假定一个孔与所有其他孔可互换。 阅读原始研究,PMID 6154544.
有多少个孔位于边缘?
考虑一个 96 孔矩形板,具有 8 行和 12 列。其外边界包含 2 × 12 + 2 × (8 − 2) = 36 个孔。内部包含 6 × 10 = 60 个孔。因此 36 ÷ 96 = 37.5% 的孔位于边界上。
| 区域 | 孔 | 含义 |
|---|---|---|
| 外边界 | 36 | 需要检查是否存在位置相关模式的位点 |
| 内部 | 60 | 另一组位点,并不自动等同于未受影响的对照 |
| 总计 | 96 | 仅为几何计算;不暗示任何实验效应量 |
这是一个几何计算。这并不意味着 37.5% 的测量结果是错误的,也不意味着所有边缘孔都应被丢弃。
保留板图
记录每个孔的处理、对照、样本标识和位置。如果一种处理只占用边缘孔,而对照只占用中央孔,那么该设计使处理和位置难以区分。仅凭结果无法厘清这一选择。
在方法开发期间,在你计划使用的位置上比较等效的对照条件。位置模式可以提示检查板表面、操作和环境条件。相关检查取决于具体测定。蛋白结合测定和活细胞测定不一定有相同的变异原因。
在读取结果之前决定排除标准
不要仅仅因为某个边缘孔结果与期望的结论不符就将其删除。使用该测定计划的质量标准,并记录任何被排除测量的原因。如果实验无法区分处理与位置,那么用合适的设计重复实验,可能比从现有数据中强行得出强结论更有信息量。
将测定与材料联系起来
在比较 LL-37 研究材料 或 MOTS-c 研究材料时,请将声明的身份、提供的形态、数量依据和可用的批次记录与板图一并保留。信号变化可能来自材料、检测方法或两者的相互作用;位置检查有助于避免过早下结论。
咨询所选研究变体 以及您的项目所需的记录。已发表的检测结果不能确立某个 NHD 批次的性质。目录材料仅供研究、开发和制造使用,不用于人类或兽医用途。
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