Supposons que le signal le plus fort dans un test de peptide apparaisse le long du bord de la plaque. Avant de conclure que le peptide a causé le changement, vérifiez où les traitements et les contrôles ont été placés. Un schéma qui suit la position sur la plaque mérite une investigation différente d'un schéma qui suit le traitement.
La plaque fait partie de la mesure
Une étude d'immunodosage enzymatique 1980 a examiné l'adsorption des protéines sur des plaques de microtitration. Elle a rapporté des coefficients de variation d'adsorption de 5.2–29.5% et une adsorption plus élevée dans les puits de bord. Dans un dosage sandwich, la variation rapportée pour un échantillon individuel était de ±18%. Ces résultats concernaient les immunodosages et les systèmes de plaques testés, et non le LL-37, le MOTS-c ou le matériel NHD. Ils montrent pourquoi un puits ne doit pas être supposé interchangeable avec tous les autres puits. Lire l'étude originale, PMID 6154544.
Combien de puits se trouvent sur le bord ?
Considérez une plaque rectangulaire à 96 puits avec 8 rangées et 12 colonnes. Son bord extérieur contient 2 × 12 + 2 × (8 − 2) = 36 puits. L'intérieur contient 6 × 10 = 60 puits. Ainsi 36 ÷ 96 = 37.5% des puits se trouvent sur le bord.
| Région | Puits | Signification |
|---|---|---|
| Bord extérieur | 36 | Positions à examiner pour un motif lié à l'emplacement |
| Intérieur | 60 | Un ensemble différent de positions, pas automatiquement un contrôle non affecté |
| Total | 96 | Géométrie uniquement ; aucune taille d'effet expérimental n'est sous-entendue |
Il s'agit d'un calcul géométrique. Cela ne signifie pas que 37.5% des mesures sont erronées, ni que tous les puits de bord doivent être écartés.
Conserver la carte de plaque
Enregistrez le traitement, le contrôle, l'identifiant d'échantillon et la position de chaque puits. Si un traitement occupe uniquement des puits de bordure et que le contrôle occupe uniquement des puits centraux, le plan rend le traitement et l'emplacement difficiles à séparer. Un résultat seul ne peut pas démêler ce choix.
Pendant le développement de la méthode, comparez des conditions de contrôle équivalentes dans les positions que vous prévoyez d'utiliser. Un schéma de position peut inciter à vérifier la surface de la plaque, la manipulation et les conditions environnementales. La vérification pertinente dépend du test. Un test de liaison protéique et un test sur cellules vivantes n'ont pas nécessairement la même cause de variation.
Décidez des exclusions avant de lire le résultat
Ne supprimez pas un résultat de bordure simplement parce qu'il contredit la conclusion souhaitée. Utilisez les critères de qualité prévus du test et documentez la raison de toute mesure exclue. Si l'expérience ne peut pas distinguer le traitement de la position, la répéter avec un plan approprié peut être plus instructif que de forcer une affirmation forte à partir des données existantes.
Reliez le test au matériel
Lors de la comparaison Matériel de recherche LL-37 ou Matériel de recherche MOTS-c, conservez l'identité déclarée, la forme fournie, la base de quantité et les enregistrements de lot disponibles avec la carte de plaque. Un signal modifié peut provenir du matériau, du test ou de leur interaction ; les contrôles de localisation aident à éviter une explication prématurée.
Renseignez-vous sur la variante de recherche sélectionnée et les enregistrements exigés par votre projet. Les résultats de tests publiés n'établissent pas les propriétés d'un lot NHD. Les matériaux de catalogue sont destinés à la recherche, au développement et à la fabrication, et non à l'usage humain ou vétérinaire.
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