Supongamos que la señal más intensa en un ensayo de péptidos aparece a lo largo del borde de la placa. Antes de decidir que el péptido causó el cambio, comprobemos dónde se colocaron los tratamientos y los controles. Un patrón que sigue la posición en la placa merece una investigación diferente de un patrón que sigue al tratamiento.
La placa es parte de la medición
Un estudio de enzimoinmunoensayo con 1980 examinó la adsorción de proteínas en placas de microtitulación. Informó coeficientes de variación de adsorción de 5.2–29.5% y mayor adsorción en los pocillos del borde. En un ensayo sándwich, la variación reportada para una muestra individual fue de ±18%. Estos hallazgos se refirieron a los inmunoensayos y sistemas de placas probados, no a material de LL-37, MOTS-c ni NHD. Muestran por qué no se debe suponer que un pocillo sea intercambiable con cualquier otro pocillo. Lea el estudio original, PMID 6154544.
¿Cuántos pocillos hay en el borde?
Considere una placa rectangular de 96 pocillos con 8 filas y 12 columnas. Su borde exterior contiene 2 × 12 + 2 × (8 − 2) = 36 pocillos. El interior contiene 6 × 10 = 60 pocillos. Así, 36 ÷ 96 = 37.5% de los pocillos están en el borde.
| Región | Pocillos | Significado |
|---|---|---|
| Borde exterior | 36 | Posiciones a examinar para un patrón relacionado con la ubicación |
| Interior | 60 | Un conjunto diferente de posiciones, no automáticamente un control no afectado |
| Total | 96 | Solo geometría; no se implica ningún tamaño de efecto experimental |
Este es un cálculo geométrico. No significa que 37.5% de las mediciones estén mal, ni que todos los pocillos del borde deban descartarse.
Mantener el mapa de la placa
Registre el tratamiento, el control, el identificador de muestra y la posición de cada pocillo. Si un tratamiento ocupa solo pocillos del borde y el control ocupa solo pocillos centrales, el diseño ha hecho que el tratamiento y la ubicación sean difíciles de separar. Un resultado por sí solo no puede desentrañar esa elección.
Durante el desarrollo del método, compare condiciones de control equivalentes en las posiciones que planea usar. Un patrón de posición puede motivar verificaciones de la superficie de la placa, la manipulación y las condiciones ambientales. La verificación relevante depende del ensayo. Un ensayo de unión a proteínas y un ensayo con células vivas no tienen por qué tener la misma causa de variación.
Decida las exclusiones antes de leer el resultado
No elimine un resultado del borde simplemente porque no concuerda con la conclusión deseada. Use los criterios de calidad planificados del ensayo y documente el motivo de cualquier medición excluida. Si el experimento no puede distinguir el tratamiento de la posición, repetirlo con un diseño adecuado puede ser más informativo que forzar una afirmación contundente a partir de los datos existentes.
Conecte el ensayo con el material
Al comparar material de investigación LL-37 o material de investigación de MOTS-c, conserve la identidad declarada, la forma suministrada, la base de cantidad y los registros de lote disponibles junto con el mapa de la placa. Una señal modificada puede provenir del material, del ensayo o de su interacción; las comprobaciones de ubicación ayudan a evitar una explicación prematura.
Pregunte sobre la variante de investigación seleccionada y los registros que requiere su proyecto. Los hallazgos de ensayos publicados no establecen las propiedades de un lote NHD. Los materiales de catálogo son para investigación, desarrollo y fabricación, no para uso humano o veterinario.
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