Du hast einer Probe eine bekannte Menge des Zielstoffs zugesetzt – stimmt die zusätzlich gemessene Menge mit der zugesetzten Menge überein? Das ist die Frage, die ein Spike-Wiederfindungsexperiment üblicherweise beantwortet. Es hilft bei der Bewertung einer Methode, ist aber kein Knopf, der jede Probe automatisch korrigiert.
Zuerst verstehen, was beim Spiken zugesetzt wird
Beim Spiken wird einer Probe in der Regel ein Referenzmaterial mit eindeutiger Identität und bekanntem Gehalt zugesetzt und anschließend die vorgeschriebene Aufarbeitung und Messung durchgeführt. Zugesetzt wird ein bekannter Zielstoff, nicht irgendeine Flasche mit einem gleichnamigen Rohmaterial. Das Experiment erfordert Kenntnis der Gehaltsbasis des Referenzmaterials, der zugesetzten Menge und des Zeitpunkts des Spikens. Unterschiedliche Matrices und Konzentrationsniveaus können sich unterschiedlich verhalten; Ergebnisse unter einer Bedingung lassen sich nicht auf alle Proben verallgemeinern.
Am leichtesten übersehen wird die bereits in der Originalprobe vorhandene Menge
Angenommen, die ungespikte Probe ergibt 10.0 μg, die gespikte Probe 14.5 μg, die der entsprechenden Probe zugesetzte Referenzmenge beträgt 5.0 μg, und alle Ergebnisse sind auf eine vergleichbare Basis umgerechnet. Wiederfindung = (14.5 − 10.0) ÷ 5.0 × 100% = 90%. Würde man 14.5 direkt durch 5.0 teilen, würde man den bereits in der Originalprobe vorhandenen Zielstoff in die „Wiederfindung“ einrechnen. Diese drei Zahlen sind didaktische Annahmen, keine Daten aus einem realen Chargenversuch.
Didaktisches Rechenbeispiel: erst die Originalprobe abziehen, dann durch die zugesetzte Menge teilen
- Ungespikt / nach dem Spiken: 10.0 μg / 14.5 μg (auf gemeinsame Basis umgerechnet)
- Zusätzlich zugesetzt: 5.0 μg
- Spike-Wiederfindung: (14.5 − 10.0) ÷ 5.0 × 100% = 90%
Durch die zugesetzte Lösung können sich Nenner und Volumen ändern
Wird in Konzentration berichtet, verändert die Zugabe einer Standardlösung das Volumen, und das Verdünnungsverhältnis von Original- und gespikter Probe muss gemeinsam behandelt werden. Man kann zunächst alles auf die Masse der jeweiligen Probe umrechnen und dann den obigen Vergleich durchführen; ebenso ist eine validierte Korrektur von Konzentration und Volumen möglich. Ohne Aufzeichnung des Endvolumens lässt sich mit einer Gruppe von Konzentrationswerten allein möglicherweise nicht sauber rechnen. Ob die Kontrollprobe die gleiche Menge an Leerlösungsmittel erhalten muss, sollte ebenfalls bei der Planung geklärt werden.
Der Zeitpunkt des Spikens bestimmt, welche Schritte es abdeckt
Wird vor der Extraktion gespikt, können die Ergebnisse Einflüsse weiterer Aufarbeitungsschritte enthalten; wird erst nach der Extraktion zugesetzt, lässt sich damit nicht belegen, dass die vorangehende Extraktion verlustfrei war. Bei Materialien wie GHK-Cu, bei denen der chemische Zustand eine Rolle spielt, muss außerdem geprüft werden, ob das zugesetzte Referenzmaterial zum zu bestimmenden Objekt passt und ob die Aufarbeitung den gemessenen Zustand verändert hat. Eine einzelne Wiederfindungszahl beantwortet diese Identitätsfragen nicht von selbst.
Ob 90% akzeptabel ist, hängt zuerst vom Verwendungszweck ab
Dieser Artikel legt keinen einheitlichen Akzeptanzbereich fest. Die Bewertung sollte sich am Verwendungszweck der Methode, am Konzentrationsniveau, an der Wiederholbarkeit und an vorab festgelegten Kriterien orientieren. Bei auffälliger Wiederfindung prüft man zuerst Referenzmaterial, Volumen, Matrixstörungen, Aufarbeitungsverluste und Instrumentenansprechverhalten; man sollte nicht einfach alle Ergebnisse durch 0.90 teilen und erklären, man habe den wahren Gehalt erhalten. Ob und wie eine Korrektur zulässig ist, muss der jeweiligen methodischen Grundlage entsprechen. [1]
Ergebnisse so dokumentieren, dass andere sie nachrechnen können
Dokumentiere das ungespikte Ergebnis, das Ergebnis nach dem Spiken, die bekannte zugesetzte Menge, die Volumenbehandlung, den Zeitpunkt der Zugabe und die Rechenformel. Bei der Einsendung von Materialien wie Glutathion oder GHK-Cu kann man angeben, ob vor allem die quantitative Abweichung oder die Wiederfindung eines bestimmten Schritts von Interesse ist, und das Design vom Labor bestätigen lassen. Katalogmaterialien sind keine Standardmaterialien, die von Natur aus zur Wertzuweisung geeignet sind; die Verwendung von Referenzmaterialien und gewöhnlichen Forschungsmaterialien sollte getrennt geklärt werden.
Originalquellen
Studienbedingungen und Materialunterlagen getrennt prüfen. Gekennzeichnete Rechenbeispiele sind keine Chargenprüfergebnisse.
Glutathione
GHK-Cu
