ペプチドアッセイで最も強いシグナルがプレートの端に沿って現れたとします。その変化がペプチドによるものと判断する前に、処理と対照がどこに配置されたかを確認してください。プレートの位置に従うパターンは、処理に従うパターンとは別の検討が必要です。
プレートは測定の一部です
1980 酵素免疫測定法の研究で、マイクロタイタープレートへのタンパク質吸着が検討されました。吸着の変動係数は 5.2～29.5% と報告され、外縁ウェルではより高い吸着が示されました。あるサンドイッチアッセイでは、個別サンプルの報告された変動は ±18% でした。これらの知見は、試験された免疫測定法およびプレートシステムに関するものであり、LL-37、MOTS-c、または NHD 材料に関するものではありません。これは、あるウェルが他のすべてのウェルと互換性があると仮定すべきではない理由を示しています。 原著研究を読む、PMID 6154544.
縁にはいくつのウェルがありますか？
8行と12列を持つ長方形の96ウェルプレートを考えます。その外縁には2 × 12 + 2 × (8 − 2) = 36個のウェルがあります。内部には6 × 10 = 60個のウェルがあります。したがって、36 ÷ 96 = 37.5%のウェルが境界上にあります。
| 領域 | ウェル | 意味 |
|---|---|---|
| 外縁 | 36 | 位置関連パターンを調べるためのウェル位置 |
| 内側 | 60 | 別の位置セットであり、自動的に影響を受けない対照ではない |
| 合計 | 96 | 幾何学的な計算のみであり、実験的な効果量を示唆するものではない |
これは幾何学的な計算です。これは、測定値の37.5%が誤っていることや、すべての外周ウェルを破棄すべきであることを意味するものではありません。
プレートマップを保管する
各ウェルの処理、対照、サンプル識別子、位置を記録します。ある処理が外周ウェルだけを占め、対照が中央ウェルだけを占めている場合、そのデザインでは処理と位置を分離することが難しくなります。結果だけではその選択を解きほぐすことはできません。
メソッド開発中は、使用予定の各ポジションで同等の対照条件を比較してください。ポジションパターンは、プレート表面、ハンドリング、環境条件の確認を促すことがあります。適切な確認はアッセイによって異なります。タンパク質結合アッセイと生細胞アッセイでは、変動の原因が同じである必要はありません。
結果を読む前に除外を決める
望ましい結論と一致しないという理由だけで境界の結果を除外しないでください。アッセイで計画された品質基準を用い、除外した測定があればその理由を記録してください。実験で処理とポジションを区別できない場合は、既存データから強い主張を無理に導くより、適切な設計で再実施する方が有益なことがあります。
アッセイを材料と結び付ける
比較する際は LL-37 研究用材料 または MOTS-c研究材料、申告された同一性、提供形態、量の基準、利用可能なロット記録をプレートマップとともに保管してください。シグナルの変化は、材料、アッセイ、またはその相互作用から生じることがあります。位置の確認は、早計な説明を避けるのに役立ちます。
選択した研究用バリアントについてお問い合わせください およびプロジェクトに必要な記録。公表されたアッセイの知見は、NHD ロットの特性を確立するものではありません。カタログ材料は研究、開発、製造用であり、ヒトまたは獣医学用ではありません。
この記事の解釈方法
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研究用途の境界： このウェブサイトで取り上げるカタログ材料は、実験室の研究、開発、製造専用であり、ヒトまたは動物への使用を目的としません。本内容は医療助言ではなく、投与指示を提供しません。
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