Angenommen, das stärkste Signal in einem Peptid-Assay erscheint entlang des Randes der Platte. Bevor Sie entscheiden, dass das Peptid die Veränderung verursacht hat, prüfen Sie, wo die Behandlungen und Kontrollen platziert wurden. Ein Muster, das der Position auf der Platte folgt, verdient eine andere Untersuchung als ein Muster, das der Behandlung folgt.
Die Platte ist Teil der Messung
Eine 1980-Enzym-Immunoassay-Studie untersuchte die Proteinadsorption auf Mikrotiterplatten. Sie berichtete Adsorptions-Variationskoeffizienten von 5.2–29.5% und eine höhere Adsorption in Randvertiefungen. In einem Sandwich-Assay betrug die berichtete Variation für eine einzelne Probe ±18%. Diese Ergebnisse betrafen die getesteten Immunoassays und Plattformsysteme, nicht LL-37, MOTS-c oder NHD-Material. Sie zeigen, warum eine Vertiefung nicht als mit jeder anderen Vertiefung austauschbar angesehen werden sollte. Lesen Sie die Originalstudie, PMID 6154544.
Wie viele Vertiefungen befinden sich am Rand?
Betrachten Sie eine rechteckige 96-Vertiefungsplatte mit 8 Reihen und 12 Spalten. Ihr äußerer Rand enthält 2 × 12 + 2 × (8 − 2) = 36 Vertiefungen. Das Innere enthält 6 × 10 = 60 Vertiefungen. Somit liegen 36 ÷ 96 = 37.5% der Vertiefungen am Rand.
| Bereich | Vertiefungen | Bedeutung |
|---|---|---|
| Äußerer Rand | 36 | Positionen, die auf ein ortsbezogenes Muster untersucht werden sollen |
| Innenbereich | 60 | Eine andere Gruppe von Positionen, nicht automatisch eine unbeeinflusste Kontrolle |
| Gesamt | 96 | Nur Geometrie; es wird keine experimentelle Effektstärke impliziert |
Dies ist eine geometrische Berechnung. Sie bedeutet nicht, dass 37.5% der Messungen falsch sind oder dass alle Randvertiefungen verworfen werden sollten.
Behalte die Plattenkarte bei
Erfassen Sie die Behandlung, die Kontrolle, die Probenkennung und die Position jedes Wells. Wenn eine Behandlung nur Randwells belegt und die Kontrolle nur zentrale Wells, erschwert das Design die Trennung von Behandlung und Position. Ein einzelnes Ergebnis kann diese Entscheidung nicht auflösen.
Vergleichen Sie während der Methodenentwicklung äquivalente Kontrollbedingungen über die Positionen, die Sie verwenden möchten. Ein Positionsmuster kann Anlass geben, die Plattenoberfläche, die Handhabung und die Umgebungsbedingungen zu prüfen. Die relevante Prüfung hängt vom Assay ab. Ein Proteinbindungs-Assay und ein Lebendzell-Assay müssen nicht dieselbe Ursache der Variation haben.
Entscheiden Sie Ausschlüsse, bevor Sie das Ergebnis lesen
Entfernen Sie ein Rand-Ergebnis nicht einfach, weil es der gewünschten Schlussfolgerung widerspricht. Verwenden Sie die geplanten Qualitätskriterien des Assays und dokumentieren Sie den Grund für jede ausgeschlossene Messung. Wenn das Experiment Behandlung und Position nicht unterscheiden kann, kann eine Wiederholung mit geeignetem Design aussagekräftiger sein, als eine starke Aussage aus den vorhandenen Daten zu erzwingen.
Verbinden Sie den Assay mit dem Material
Beim Vergleich von LL-37-Forschungsmaterial oder MOTS-c-Forschungsmaterial, behalten Sie die deklarierte Identität, die gelieferte Form, die Mengenbasis und die verfügbaren Chargenaufzeichnungen zusammen mit der Plattformkarte. Ein verändertes Signal kann vom Material, vom Assay oder von deren Wechselwirkung stammen; Positionsprüfungen helfen, eine voreilige Erklärung zu vermeiden.
Fragen Sie nach der ausgewählten Forschungsvariante und den Aufzeichnungen, die Ihr Projekt erfordert. Veröffentlichte Assay-Ergebnisse belegen nicht die Eigenschaften einer NHD-Charge. Katalogmaterialien sind für Forschung, Entwicklung und Fertigung bestimmt, nicht für den menschlichen oder veterinärmedizinischen Gebrauch.
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